Caracterización funcional de receptores nicotínicos en neuronas amacrinas de retina de rata

FERNANDA GUMILAR; LUIS POLITI; CECILIA BOUZAT

Buzios, Brasil

Congreso; I Congreso IBRO/LARC de Neurociencias de América Latina, Caribe y Península Ibérica.; 2008

IBRO/LARC

La retina constituye un modelo de sistema nervioso central, ya que comparte con éste un mismo origen embrionario y presenta mecanismos semejantes de transmisión de señales. Las células amacrinas de retina de vertebrados son interneuronas con funciones aún poco claras. Objetivos: Identificar funcionalmente subtipos de receptores nicotínicos neuronales (AChRs) en células amacrinas en cultivo y conocer los efectos celulares producidos por la activación o bloqueo de dichos receptores. Métodos: Mediante la técnica de patch-clamp, realizamos registros de corrientes macroscópicas activadas por agonistas nicotínicos en neuronas de cultivos de diferentes días. Utilizamos microscopía confocal y la sonda fluorescente Fluo-3/AM para evidenciar movimiento de Ca2+. Mediante tinciones citotoquímicas observamos cambios celulares en presencia de agonistas o antagonistas nicotínicos. Resultados: Por medio de marcación con a-bungarotoxina demostramos la presencia del receptor nicotínico a7 en la superficie de células amacrinas. Detectamos corrientes activadas por agonistas nicotínicos después del día ocho de cultivo. Observamos don tipos de respuestas: una lenta, evidenciada por corrientes con constante de decaimiento (td) del orden de 70 ms y otra rápida con td del orden de 10 ms. Esta última podría corresponder a AChRs del tipo a7. Debido a que el receptor a7 es altamente permeable a iones Ca2+, utilizamos la sonda fluorescente Fluo-3/AM para evidenciar su actividad. La activación con nicotina o ACh reveló el ingreso de Ca2+ a células amacrinas. El bloqueo con el antagonista específico del receptor a7 (a-bungarotoxina) inhibió la señal, indicando la presencia de receptores a7 funcionales. En presencia de nicotina, las neuritas de células amacrinas en cultivo son significativamente más prolongadas que las del control. Conclusión: Los resultados muestran que: las neuronas amacrinas presentan al menos dos subtipos de receptores nicotínicos funcionales y los agonistas nicotínicos tienen un rol funcional en este tipo de neuronas. Nuestro estudio abre la puerta para estudiar los roles en la retina y sus posibles cambios durante el desarrollo.