Producción de embriones de búfalo por fertilización in vitro.

KONRAD, JL; SCIAN, R; GARRIDO, MJ; TAMINELLI, G; CRUDELI, G; SANSINENA, M

Jornada; XXXIV Sesión de comunicaciones científicas; 2013

UNNE

Nuestro país posee varias regiones subexplotadas desde el punto de vista ganadero debido a la falta de adaptación del ganado vacuno a sectores inundables. El búfalo (Bubalus bubalis) representa una herramienta valiosa para la expansión ganadera de zonas marginales como el nordeste argentino. El mejoramiento genético en búfalos mediante la transferencia de embriones in vivo ha tenido escaso éxito, debido a la escasa respuesta ovárica a la estimulación de la ovulación mediante gonadotropinas. Por su eficiencia de la utilización del germoplasma y por su efecto sobre el intervalo generacional, la producción de embriones por fertilización in vitro es una herramienta productiva de gran impacto en el progreso genético. El objetivo del presente trabajo es estudiar los eventos tempranos de este tipo fertilización en la especie bubalina. Ovocitos de búfala fueron recuperados por punción folicular, con jeringa de 5 ml y aguja de 21G, de ovarios postmortem; fueron aislados bajo lupa a 40X, y clasificados (Grados 1 a 4, IETS). Se colocaron con medio de transporte para maduración in vitro en una transportadora de embriones de temperatura controlada a 37°C durante 18 horas. Luego se evaluaron en base a la presencia y grado de expansión de las células del cumulus y se procedió al pelado mecánico del mismo. El estado de maduración fue evaluado por presencia del primer cuerpo polar a las 18 horas. Los ovocitos fueron coincubados para fertilización en microgotas de suspensión de espermatozoides durante un período de 6 horas. Luego fueron lavados dos veces en medio de cultivo embrionario y cultivados a 38,5°C durante 7 días. Algunos ovocitos fueron seleccionados para evaluación de maduración nuclear y configuración de cromatina, por tinción con bisbenzimida y visualización en microscopio invertido y de fluorescencia. Fueron clasificados en GV (vesícula germinal), GVBD (vesícula germinal en transición), MI (metafase I) y MII (metafase II). La maduración in vitro indicó que es viable realizar la misma durante el transporte sin afectar la calidad y la maduración nuclear de los ovocitos. Además, se observó una alta proporción de lisado y una significativa disminución de la viabilidad y maduración nuclear del ovocito bubalino de menor calidad. De un total de 29 ovocitos transportados, el día 2 se encontraron clivados el 34%; luego del cultivo, el 21% de los embriones eran de 16 células, un 10% mórula y 3% blastocito. En coincidencia con reportes de otros investigadores, el clivaje y la producción de blastocitos de embriones bubalinos de este estudio preliminar, resultaron ser significativamente menores que aquellos observados para el bovino. No se observaron efectos significativos de la maduración in vitro durante el transporte de los ovocitos bovinos. Se concluye, según nuestro conocimiento, que este es el primer informe en el mundo de fertilización in vitro en búfalos y producción de embriones luego de la maduración in vitro de ovocitos durante el transporte por 18 horas. En futuros ensayos se podrán evaluar estrategias para mejorar la calidad y competencia de los ovocitos transportados así como de los métodos para aumentar las tasas de clivaje y blastocito del embrión bubalino.