“Detección de Serpina IF en tejidos de rata”

PIÑEIRA CASTRO T; CARMONA MC; PIETROBON EO; MONCLUS MA

Congreso; Reunión Conjunta III Foro de Investigación para la Salud- Ministerio de Salud, XII Jornadas de Investigación de la Facultad de Cs. Médicas UN Cuyo y I Jornadas de Investigación del Hospital Universitario UN Cuyo.; 2012

Facultad de Ciencias Médicas, U. N. de Cuyo

Los espermatozoides de rata se asocian entre sí formando “Rosetas” durante su almacenamiento en la cola epidídimaria. Dos Serpinas fueron aislados por cromatografía a partir del Fluido Epididimario de la región caudal. Mediante ensayos in vitro se logró reproducir el fenómeno de formación de Rosetas, incubando espermatozoides aislados en presencia de estas proteínas. Esto permite inferir su participación en la formación de Rosetas en la rata. Con el objeto de establecer si una de estas Serpinas, de 47 KDa, aislada del Fluído Epididimario se localiza en las células epiteliales de este órgano, se generaron anticuerpos policlonales por inoculación en conejo. También se ensayó un anticuerpo policlonal comercial contra la proteína PEDF que comparte alta homología de secuencia con la serpina en estudio. Se realizó técnica de Inmunohistoquímica (IHQ) sobre secciones de epidídinmo de las regiones de cabeza, cuerpo y cola. El revelado se realizó con Di Amino Bencidina. También se utilizó Inmuno Fluorescencia Indirecta (IFI) con un anticuerpo secundario Anti-Rabbit acoplado a FITC. Como contraste se utilizó la tinción con Hoechst de los núcleos. Las secciones de epidídimo analizadas por ambas técnicas, IHQ e IFI, revelaron marcación positiva para el antisuero policlonal de conejo y también para el anticuerpo contra PEDF. La marca se localizó en la región supranuclear de las células principales del epitelio y también sobre las estereocilias características de este tejido. La positividad por ambas técnicas para estas Serpina permite inferir la producción de las misma por parte de las células epiteliales a lo lardo del ducto epididimario.