Localización, aislamiento y caracterización de proteínas tiólicas durante la maduración del espermatozoide

CABRILLANA M.E; MONCLUS MA; VINCENTI AE; FORNÉS MW; YUNES R

Huerta Grande, Córdoba

Congreso; I Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2007

Sociedad de Biología de Cuyo

LOCALIZACIÓN, AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN  DE PROTEÍNAS TIÓLICAS DURANTE LA MADURACIÓN DEL ESPERMATOZOIDE. Cabrillana ME, Monclús MA, Vincenti AE, Fornés MW, Yunes R. IHEM, FCMédicas. UNCuyo - CONICET. Mendoza. mecabrillana@fcm.uncu.edu.ar La oxidación de proteínas tiólicas se relaciona con la motilidad, capacitación, reacción acrosomal y fertilización en el espermatozoide.  Este proceso de oxido reducción de tioles (SH) a puentes disulfuro (S-S), es verificado durante el tránsito epididimario. Usando diferentes metodologías nos disponemos a caracterizar proteínas ricas en tioles. Primeramente por sonicación y ultracentrifugación en gradientes de sacarosa, fraccionamos y separamos cabezas  colas de espermatozoides. Luego comparamos espermatozoides maduros con inmaduros para establecer que proteínas específicamente sufren cambios de SH-SS. En un segundo protocolo las proteínas del espermatozoide  son tratadas con detergentes (Tritón X100 al 0.1%, DTT 32 mM, y SDS 4%) y analizadas de acuerdo a su solubilidad. Todas las muestras son incubadas con mBB que permite marcar las proteínas tiólicas. A través de microscopía de fluorescencia y electrónica podemos determinar la ubicación subcelular de las mismas.  Las proteínas tiólicas fueron separadas por SDS-PAGE y se determinó su peso molecular. Una banda proteica de 27 Kda, emite fluorescencia como así también la porción principal de la cola, observada en microscopía de fluorescencia y electrónica. En adelante haremos esfuerzos para caracterizar y aislar una por una estas proteínas.