Localización, cuantificación y separación de proteínas espermáticas con altos niveles de grupos tioles expresados durante el tránsito epididimario

CABRILLANA ME;; MONCLUS MA; VINCENTI, AE; FORNÉS. MW

Mendoza, Argentina

Simposio; XX Jornadas de Investigación y II Jornadas de Postgrado. Universidad Nacional de Cuyo; 2006

Secretaría de Ciencia, Técnica y Posgrado, UN de Cuyo

  Nuestro objetivo es localizar y aislar proteínas que sufre modificaciones en el estado de Oxidación/Reducción durante el tránsito epididimario (conversión de tiol a sulfuro). Esto le permite a la gameta capacitarse y fertilizar al ovocito. Los puentes di sulfuro están vinculados a la condensación de cromatina, estabilización del ADN y la estructura de la cola. Esta compactación/estabilización extra de las proteínas se debería al ambiente oxido reductor del   fluido epididimario, muy evidente en rata. Hemos utilizado técnicas de sonicación y ultracentrifugación en gradiente de sacarosa, para separar y fraccionar las cabezas y colas de espermatozoides respectivamente.  Posteriormente las proteínas son tratadas con monobromo bimano (mBB) el cual se une a grupos tioles de las mismas y comprobamos mediante microscopía de fluorescencia. Extraemos las proteínas de este material que son separadas por SDS-PAGE, método que nos permite identificar el grupo de proteínas unidas al mBB. Nuestros resultados muestran un predominio de las proteínas unidas a mBB en la cola de espermatozoides que provienen de la  cabeza de epidídimo (inmaduros), datos que se correlacionan con proteínas de aproximadamente 20 KDa, observadas en geles de poliacrilamida, a través de un transiluminador.