Caracterización de microdominios de membrana (RAFT) durante la capacitación y fertiliación

BOARELLI PAOLA VANINA; MONCLUS MA; VINCENTI AE; FORNES MW

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas.; 2004

SAFE, SAIB, SAIC, SAB

Los microdominios (MD) lipídicos de la membrana plasmática se asocian con diversas funciones. Una de ellas es la transducción de señales (TdS). La capacitación de la gameta masculina involucra un mecanismo original de TdS donde el colesterol © de la membrana cumple un rol importante. Nuestro estudio está orientado a la caracterización y relación de los MD con las funciones específicas en este tipo de células. El C se asocia a glicolípidos y proteínas constituyendo MD. Uno de nuestros objetivos es co-localizar los componentes lipídicos de los MD; colesterol y esfingolípidos (GM1); mediante marcación específica con el filipin III (FIII) y subunidad b-toxina colérica (TC) respectivamente. Se sacrificaron ratones adultos (cepa Balb cd). Los E de cola de epidídimo fueron incubados en medio de capacitación –albúmina y bicarbonato- 60´ (experimental) y en PBS 10´(control sin capacitar) a 37º y 5% de CO2. Luego los E fueron fijados y tratados con FIII (30´) y TC (15´). Las muestras fueron analizadas por microscopía de fluorescencia. Para analizar el rol de los MD en la fertilización se realizaron estudios de inhibición incubando los E con los marcadores específicos (FIII y TC); y posteriormente ensayos de fertilización (FIV). En los E no capacitados, el FIII se localiza en la zona acrosomal excepto en E capacitados, donde solo se observa marca en la gota citoplásmica. La TC, en los E capacitados, se localiza en la zona acrosomal. TC se observa marcando el gangliósido GM1 en la zona postacrosomal luego de la capacitación (redistribución). En ensayos preliminares el gangliósido GM1 se localizó a nivel postacrosomal; siendo ésta la zona de unión entre los ovocitos y los E durante la fertilización. Los resultados de FIV, sugieren que los componentes al redistribuirse tras la capacitación tienen un rol importante en la fertilización, pero aún no está del todo definido. En los primeros ensayos, si bien el bloqueo de los componentes de los MD produjo una disminución en la unión, estadísticamente no resultó significativa.