Correlación entre FIV y alteraciones de un marcador de capacitación espermática, la fosforilación en tirosina

MONCLUS M.A.; VINCENTI A.E; ORTEGA S.; MARTINEZ A.; FORNÉS M.W.

San Luis, Argentina

Congreso; . XIX Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 2001

Sociedad de Biología de Cuyo

La capacitación espermática involucra una serie de cambios funcionales que habilitan a la gameta para fertilizar al ovocito. Un marcador de ellos es la fosforilación de proteínas en tirosina (pY) que se observa claramente al comparar los patrones de bandas provenientes de espermatozoides no capacitados (sin incubar en cndiciones capacitantes) versus los capacitados (incubaciones mayores a 6 hs. o con estimulantes de Adenilato Ciclasa) . A su vez, la búsqueda de un marcador de capacidad fertilizante de una muestra sería de gran utilidad de predecir el resultado de una fertilización in vitro (FIV). Como control se podría utilizar una situación natural que es la asteenozoospermia que tienen  bajo porcentaje de éxito y que, de tener alteraciones de la pY nos ayudaría en la de   definición de este parámetro (pY) como marcador de fertilidad. Se estudiaron muestras de espermatozoides normales y con diferentes anomalías seminales y astenozoospermias. Luego de la determinación de los parámetros básicos el resto de los espermatozoides fueron lavados y mantenidos en condiciones capacitantes por tiempos variables(entre 0 min.-control- y 12 hs.). Luego de la incubación fueron lavados con PBS (0,02mM, pH 7,4) y se les extrajeron proteínas, las que se corrieron en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE, 10-12%: Laemmli, 1970). Luego se realizaron los inmunoblots siguiendo el método descripto por Kalab (1991) utilizando un anticuerpo anti pY (pY20, UBI). y un kit de revelado Sigma ( Extravidin, Sigma). La FIV se llevó a cabo según el protocolo de uso habitual en la Clínica. Los pacientes con parámetros seminales normales nos mostraron patrones de bandas en los inmunoblots variables. Esta variaciones fueron desde un incremento en el número de bandas e inversión (alto al inicio de la incubación y disminución durante la incubación). Los blots correspondientes a astenozoospermias mostraron igueles situaciones. La correlación con la FIV -positiva o negativa- no arrojó aaún un valor significativo. Los resultados nos mostraron patrones muy variables, lo que dificulta mas la comparación con FIV y el número de estas es aún bajo para poder obtener conclusiones.