Capacitación espermática y fertilización en espermatozoides de ratón

BOARELLI PAOLA VANINA; MONCLUS M.A.; DE ROSAS J.C.; FORNÉS M.W.

Santiago, Chile

Congreso; XXVI Congreso Chileno de Anatomía, VII Congreso de Anatomía del Cono Sur.; 2005

Sociedad Chilena de Anatomía

Durante la maduración y capacitación espermática se produce una redistribución de componentes de membrana; especificamente en estructuras que han sido tambien identificadas en otros tipos celulales y conocidas como microdominios raft (MD). Los componentes principales involucrados son el colesterol (C) y los esfingolípidos (GMl), que a su vez están asociados a proteínas específicas constituyendo una unidad que se reestructura. Esta reestructuración esta intimamente relacionada con la función espennática.Los espermatozoides (E) de ratón obtenidos de la última porción del epididimo fueron alicuotados e incubados una hora a 37°C y 5% C02 en medio de cultivo HM (control) y HME (experimental) suplementado con albúmina de suero bovino (ESA) y NaC03H (ES). Los cambios estructurales en los MD pueden ser estudiados por métodos de marcación especificos para cada componente. Así, post-incubación los E fueron fijados y marcados: C con filipin 111 (F) (fluorescente perse) y GMI con toxina colérica subunidad beta (CT)(Alexa Fluor@). Posterionnente las alícuotas correspondientes a control y experimental se analizaron por microscopía de fluorescencia. Como resultado, se observó diferentes patrones de fluorescencia. Los E control tratados con F presentan una señal de fluorescencia mas intensa en la región acrosomal en comparación al experimental, lo que confirma la pérdida de C que se produce durante la capacitación.. En los E tratados con CT se observa patrones de redistribución de GMI desde la región acrosomal (control) hacia la postacrosomal (experimental).Teniendo en cuenta estos resultados y que la región postacrosomal está asociada a la fertilización, el bloqueo adecuado de GMl con CT provocaría una disminucíón en el binding entre E y ovocitos (O). Para su estudio se llevaron a cabo técnicas de FIV, donde E sin tratamiento con CT (control) y otros con CT (experimental) se enfrentaron a 0 desprovistos de zona pelúcida procedentes de hamster (binding heterólogo). Luego de un periodo de incubación adecuado en medio de cultivo (HECM-3) se realizó el recuento de E