Fosforilación en Tirosina de proteínas como marcador de capacitación de espermatozoides humanos: adaptación al laboratorio clínico y análisis de muestras con parámetros seminales normales y alterados

MONCLUS M.A.; ORTEGA S.; MARTINEZ A.; FORNÉS M.W.

Revista de Medicina Reproductiva

CEGYR

Lugar: Buenos Aires; Año: 2001 vol. Agos p. 1 - 2

RESUMEN  La capacitación espermática tiene alta correlación con la fosforilación de proteínas en tirosina (p- Y) en varias especies. En espermatozoides humanos hay pocos estudios y menos aún como screening de patología en infertilidad. Uno de los motivos es la falta de adecuación al laboratorio clínico. Se incluyeron muestras de semen normales, oligo y astenozoospérmicas capacitadas por swim-up en HamF10 (Sigma) ­suplementado con BSA (3mg/ml) y Bicarbonato (10 mM) -durante 3 h.. En los últimos 15 min se adicionaron o no (control) IBMX y dbAMPc, ambos incrementadores de la p- Y. El sobrenadante contenía los espermatozoides mótiles y capacitados (Es-C). Una alicuota inicial del semen se usó para extraer proteínas de espermatozoides sin capacitar (Es-NC). Se extrajeron proteínas, se corrieron en SDS-PAGE y se realizó un inmunoblot (Visconti, 1995 ay 1995 b). Los inmunoblot mostraron bandas entre 20 y 110 k Da que tienen p- y en muestras provenientes de Es-C. En tanto los Es-NC sólo mostraron p- y en 2 bandas (95 y 110 k Da). El uso de IBMX+dbAMPc anticipó e incrementó la señal. Algunas muestras de pacientes mostraron alteración del patrón de bandas. Los estimulantes y las condiciones usadas de p- y permitieron acortar los tiempos y tener una señal comparable a la de tiempos mayores.