ESTUDIO INMUNOHISTOQUÍMICO DEL EFECTO DEL ANTAGONISTA DE PROGESTERONA EN GLÁNDULAS MAMARIAS CANINAS

VAQUERO PABLO; GARCÍA, MÓNICA; LACOLLA DANIEL; VELEZ, CAROLINA; AUDISIO SANTIAGO; BRIZOTTO B; CORRADA Y; TORRES PA

La Plata

Jornada; XII Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2019

AAIV-SOMEVE y UNLP

Los tumores mamarios caninos, son los más frecuentes enla perra y el par mamario inguinal es el más comprometido(Chau y col., 2013). Los altos niveles séricos de progesterona,en la fase lútea o perras castradas, favorecen su promoción.Para evaluar la acción del aglepristone, un antagonista dela progesterona, como potencial antitumoral, se utilizaronbiopsias de tejido mamario de las glándulas inguinales, dondese analizó la variación de la expresión de los receptores deprogesterona (RP) y de KI-67, un marcador de proliferación,con valor pronóstico en neoplasias. Se utilizó una poblaciónde 20 perras en fase lútea (progesterona sérica: >2ng/ml; n=20), distribuidas en los protocolos terapéuticos:Aglepristone (Alizine, Virbac), 10 mg/kg/, subcutánea;(AGLE; n=10) o Placebo (PLA, n=10). Se tomaron biopsiasbajo anestesia general de mama derecha (día -1; n=20),luego de 15 días, de mama izquierda, con ovarectomíahomolateral. Se procesaron por técnica para microscopíaóptica y se montaron en portaobjetos positivados Genex®.Para estudiar la expresión de RP y antígeno Ki-67 porinmunohistoquímica (Ramos Vara, 2005), se hidrataronen alcoholes de graduación decreciente. Se lavaron enbuffer fosfato salino (PBS), pH 7.4. Se inhibió la peroxidasaendógena con peróxido de hidrógeno 3% en PBS, se realizóla recuperación antigénica en microondas, con buffercitrato 0,01 Molar, pH 6.0 y se lavó con PBS. Se bloqueóla biotina endógena (Avidin-biotin-blocking-reagents, CellMarque); y se lavó con PBS. Para bloquear los anticuerposinespecíficos se incubó con suero equino diluido en PBS(1/100) a temperatura ambiente. Sin lavar, se agregó elanticuerpo primario (anti-RP; Pr88, o el antígeno monoclonalKi-67 NCL Leica), luego se lavó con PBS. Se incubó conanticuerpos secundarios biotinilados, inmunoglobulina anti,anticuerpos de conejo, ratón y cabra (Cytoscan), y se colocóestreptavidina-peroxidasa (Cytoscan), con lavados conPBS. Se reveló con solución cromógena diaminobenzidina(DAB Sustrate Kit) bajo control de microscopio y corte decoloración con agua corriente. El contraste se obtuvo conhematoxilina activada (Biopur). Se las deshidrató conalcoholes de graduación creciente, y luego en xilol hasta elmontaje con Canadax®, Biopur y se observó al microscopiocontando inmunomarcaciones de RP y Ki-67, (8 campos a1000 aumentos). Se calculó el porcentaje de células coninmunoexpresión contando los núcleos positivos (marrones)y negativos de 100 células. Las diferencias de las mediasse compararon por test de Student (día -1 vs. 14). El nivelde significancia se estableció en p