LA DISMINUCION DE LA ACTIVIDAD DEL NHE-1 POR SILDENAFIL SE DEBE A UN AUMENTO DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA 1 (PP1).

A YEVES; GARCIARENA C,; MARIELA NOLLY.; CHIAPPE DE CINGOLANI G; PEREZ NG; ENNIS I.; CINGOLANI HE

Jornada; Jornadas de medicina 2009, Facultad de Ciencias Médicas. UNLP. Buenos Aires, Octubre 2009.; 2009

LA DISMINUCIÓN DE LA ACTIVIDAD DEL NHE-1 POR SILDENAFIL (SIL) SE DEBE ALAUMENTO DE LA ACTIVIDAD DE LA FOSFATASA PP1.Autores: Yeves AM; Garciarena CD; Nolly MB; Chiappe de Cingolani GE; Pérez NG; Ennis IL, Cingolani HE.Lugar de Trabajo: Centro de Investigaciones Cardiovasculares, UNLP. CONICET-La Plata.e-mail de contacto (IMPORTANTE):alemy21@yahoo.com.arIntroducciónEl intercambiador Na+/H+ (NHE-1) es una proteína integral de membrana que participa en laregulación del pHi del miocardio, debido a que cataliza el intercambio electroneutro de un H+intracelular por un Na+ extracelular. El NHE-1 tiene un rol importante en el daño por isquemiay reperfusión y en el remodelamiento del miocardio después del infarto, ya que se le atribuyeel aumento del Ca+2 intracelular a través de la activación del modo reverso delintercambiador Na+/Ca+2. Recientemente, nosotros demostramos que sildenafil (SIL, inhibidorde la fosfodiesterasa 5A, PDE5A) protege al corazón del remodelamiento postinfarto en ratascon oclusión de la arteria coronaria, y esta protección está asociada con inhibición del NHE-1.ObjetivosDeterminar la vía de señalización intracelular por la cual la inhibición de PDE5A produceinhibición del NHE-1 en miocitos ventriculares aislados de gato.Materiales y métodosLos miocitos ventriculares aislados de gato se cargaron con el indicador BCECF-AM para ladeterminación del pH intracelular (pHi). La actividad del NHE-1 (JH+, mmol/L/min) sedeterminó durante la recuperación del pHi luego de una carga ácida inducida por un prepulsode amonio, en ausencia de bicarbonato. Las intervenciones farmacológicas se realizaron apHi 6.8. Por Western blot se determinó la fosforilación de las quinasas ERK1/2, p90RSK y delNHE-1. La fosforilación del NHE-1 se estimó usando un anticuerpo anti 14-3-3 que se une alsitio fosforilado Ser 703 del NHE-1. Los resultados se normalizaron con anticuerpos de lasformas no fosforiladas de dichas quinasas y del NHE-1.ResultadosLa inhibición de PDE5A con SIL (1 µmol/L) o EMD3605227/5 (0.1 µmol/L) disminuyó el JH+ de2.15±0.18, n=10 (control) a 1.24±0.17,n=10 y a 1.31±0.16,n=6 (P