MODIFICACIONES DE LA ENVOLTURA LIPÍDICA DE SINORHIZOBIUM MELILOTI PROVOCADAS POR CAMBIOS TÉRMICOS COMO HERRAMIENTA PARA MEJORAR LA SEÑALIZACIÓN TEMPRANA CON MEDICAGO SATIVA

MORRA NOELIA; CESARI A. B; PAULUCCI N.S; DARDANELLI M.S.

cordoba

Congreso; XXVI Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2023

Algunas bacterias como Sinorhizobium meliloti son capaces de establecer simbiosis con leguminosas. Las etapas tempranas de simbiosis incluyen un intercambio de señales químicas donde las membranas bacterianas juegan un rol importante en la incorporación de flavonoides (luteolina). Las estructuras de estas membranas pueden modificarse por cambios en la temperatura, afectando el éxito de la interacción. Los objetivos de este trabajo son describir el efecto de cambios térmicos sobre la composición y el estado biofísico de las envolturas lipídicas de S. meliloti, y cómo estos afectan la incorporación y distribución de luteolina. Dilucidar la composición de factores Nod (FN) producidos in vitro durante los cambios térmicos y examinar el efecto de su inoculación en los eventos de interacción tempranos y tardíos con Medicago sativa (alfalfa), para aumentar su producción. S. meliloti 1021 cultivado a 28°C en medio Luria-Bertani en fase exponencial se someterá a cambios cíclicos de temperatura (10-40-10°C) por 24 h. Se utilizará una cepa que produce la proteína fluorescente GFP para visualizar el efecto de los cambios térmicos sobre eventos de interacción temprana con raíces de alfalfa (hilos de infección). Para ello, semillas previamente desinfectadas, germinadas, y trasplantadas en macetas con vermiculita estéril, serán inoculadas y mantenidas en cámara de crecimiento con condiciones controladas y regadas con medio sin nitrógeno. Diariamente se observarán las raíces en microscopio de fluorescencia, hasta 10 días post inoculación (dpi). Las alícuotas de cultivos provenientes de los diferentes tratamientos térmicos se inducirán con 10 μM luteolina a la misma temperatura por 12 h, y la misma se cuantificará por espectrofotometría en la célula entera, membrana externa e interna. Además, se sintetizarán vesículas unilamelares grandes con lípidos extraídos de cada tratamiento térmico y se les añadirá luteolina para luego medir su incorporación y relacionar su distribución en las membranas con su composición lipídica y fluidez. Para producir FN los cultivos se inducirán con 10 μM de luteolina o exudados de semillas de alfalfa, se purificaran, su composición será analizada por UHPLC-MS/MS y serán inoculados conjuntamente con la bacteria a una concentración determinada experimentalmente. Se probarán distintas combinaciones entre FN producidos y S. meliloti expuestos a distintas temperaturas, para conocer la combinación que promueva el mejor crecimiento de la planta. Se observarán las raíces al microscopio de fluorescencia, tomando imágenes, y se contarán los hilos de infección y primordios nodulares por raíz