ESARROLLO DE UN NUEVO CANDIDATO VACUNAL CONTRA LA FIEBRE AMARILLA BASADO EN LA EXPOSICION DE ANTIGENOS EN LA SUPERFICIE DE BACULOVIRUS.

AQUILA S; TOMATIS C; FERRER MF; THOMAS P; ARRIAS PN; PIDRE ML; ROMANOWSKI V; CARRERA SILVA EA; GOMEZ RM

Vaquerias, Cordoba

Otro; XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2023

Sociedad Argentina de Virologia

Introducción. La fiebre amarilla (FA) es una enfermedad aguda y pansistémica, causada por el virus homónimo (YFV), que pertenece al género Flavivirus y se transmite por mosquitos. La enfermedad en humanos varía desde una infección asintomática hasta una fiebre hemorrágica mortal. Existe una excelente vacuna de virus atenuado para la prevención de esta enfermedad. Sin embargo, esta vacuna no puede administrarse a personas inmunodeprimidas ni a embarazadas. Por esta razón, el desarrollo de nuevas alternativas es de suma importancia.Objetivo. Desarrollar un candidato vacunal de nueva generación basado en un baculovirus recombinante (rBV) que expresa las proteínas E y NS1 del YFV en su superficie. Metodología. Se construyó sintéticamente un vector pBacPAK9 que contiene el péptido señal baculoviral de GP64, marcos de lectura abiertos de YFV prM, E, NS1 y el ectodominio de VSV-G. Este plásmido y el bácmido bApGOZA se cotransfectaron en células High Five. Entre 5 y 7 días después de la transfección, se recogió el sobrenadante del cultivo y se utilizó para infectar nuevos cultivos de células Sf9. Este procedimiento se repitió 3 veces. El rBV se recuperó de los sobrenadantes, se concentró mediante ultracentrifugación a 80.000 x g durante 75 minutos en un colchón de sacarosa al 25% (p/p), el pellet se resuspendió en PBS y se filtró usando una membrana de 0,2 µm. Este stock se tituló por el método denominado a punto final en células Sf9 (por presencia de poliedros) obteniendo el número de DICT50/ml y luego convertido a UFP/ml, alcanzando 109 UFP/ml. El virus fue caracterizado por PCR utilizando cebadores diseñados para confirmar la incorporación de los genes diana en el genoma del rBV, mediante WB utilizando un anticuerpo policlonal anti-E (GTX134024, Genetex) y mediante inmunofluorescencia indirecta utilizando un anticuerpo monoclonal anti-flavivirus (4G2). Luego, sus propiedades inmunogénicas fueron testeadas en un modelo murino. Tres grupos de 5 ratones BALB/c se inmunizaron, por vía intramuscular, con 2 dosis conteniendo 108 UFP de rBV, BV wild-type y PBS; 10 días más tarde se realizó el desafío con 250 UFP de YFV en 30 ml, por vía intracerebral.Resultados. La PCR mostró una banda correspondiente al producto de amplificación específico del tamaño esperado. El análisis por WB demostró la expresión de proteínas y la IFI confirmó la presencia de los antígenos en los viriones. El ensayo de desafío duró 17 días y demostró protección del 100% de los animales inmunizados.Conclusión. El baculovirus generado en este trabajo fue validado como candidato vacunal contra la FA mediante la evaluación de su inmunogenicidad en un modelo murino.