La inmunización de ratones con virus canarypox recombinantes que expresan la glicoproteína E2 de BVDV induce altos niveles de anticuerpos neutralizantes.

FERRER M. FLORENCIA, CONTE GRAND M. DANIELA, CRAIG M. ISABEL, JULIÁ SELENE, WEBER LAURA Y CALAMANTE GABRIELA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

En numerosos países se utilizan vacunas para controlar la infección por BVDV pero, hasta el presente, no se logró desarrollar una vacuna que confiera el nivel de protección deseado. De esta forma, la búsqueda de nuevas vacunas seguras y efectivas se focaliza en el desarrollo de vacunas de nueva generación mediante técnicas de ingeniería genética, entre ellas cabe destacar a las basadas en virus vivos no replicativos como los poxvirus. Los virus canarypox (CNPV) se utilizaron eficientemente como vectores para la expresión de genes foráneos y para la construcción de vacunas contra enfermedades infecciosas. Los vectores basados en CNPV se utilizan como vacunas a virus vivo no replicativo en mamíferos porque son capaces de desencadenar respuestas inmunes protectivas en ausencia de replicación. El objetivo de nuestro trabajo es el desarrollo de nuevos inmunógenos basados en virus canarypox (CNPV) recombinantes que puedan ser evaluados como candidatos a vacunas contra la diarrea viral bovina. En este trabajo reportamos la construcción, caracterización y evaluación de CNPV recombinantes que expresan la glicoproteína E2 de la cepa de referencia NADL del virus de la diarrea viral bovina (BVDV). Se eligió la glicoproteína de envoltura E2 como el antígeno viral a ser expresado porque es la proteína inmunodominante contra la cual se inducen anticuerpos neutralizantes de la infección viral por BVDV. En una primera etapa se obtuvo el vector de transferencia VT-GUSE2 que contiene el gen marcador uid A (codifica para la enzima GUS) y la región codificante de E2, interrumpiendo al gen CN-PC1 y bajo regulación de promotores tempranos de poxvirus. Con este VT-GUSE2 se transfectaron cultivos celulares infectados con CNPV y los virus recombinantes se seleccionaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia de X-gluc. Los virus recombinantes CN-GUSE2 se purificaron por placa. La integración en el genoma de CNPV de los genes que codifican para GUS y E2 se corroboró por PCR y Southern blot. Además, la expresión de E2 se confirmó mediante Northern y Western blots. Posteriormente, con los virus recombinantes CN-GUSE2 purificados se inmunizaron ratones, donde se determinó que los niveles de anticuerpos totales dirigidos contra E2 en el grupo inmunizado con CN-GUSE2 eran significativamente diferentes de los del grupo control inmunizado con CNPV. Además, mediante ensayos de reducción del número de placas de lisis se confirmó que esta respuesta inmune humoral era capaz de neutralizar la infección de la cepa NADL de BVDV en cultivos celulares alcanzando títulos seroneutralizantes de 2,88 y 3,35 después de 1 o 2 inmunizaciones, respectivamente. Por último, se evaluó la capacidad de los sueros de los animales inmunizados con CN-GUSE2 de neutralizar in vitro cepas de BVDV aisladas de campo (citopáticas y no citopáticas). Conclusiones En este trabajo se determinó que los CNPV recombinantes que expresan la glicoproteína E2 de BVDV constituyen un inmunógeno potente para la inducción de respuestas inmunes específicas en ausencia de replicación. Además, se observó que la inducción de un alto título de anticuerpos seroneutralizantes se obtiene luego de una única dosis del inmunógeno.Estos resultados son alentadores para el desarrollo y evaluación de vacunas de nueva generación basadas en CNPV recombinantes. En el futuro, se evaluará la capacidad de los CN-GUSE2 de desencadenar respuestas inmunes en el hospedador natural.