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Las proteínas recombinantes de uso terapéutico constituyen una alternativa sumamente eficaz para el tratamiento de múltiples enfermedades humanas. Sin embargo, en numerosos casos, la administración de tales productos conlleva al desarrollo de respuestas indeseadas en el paciente debido a un quiebre en la tolerancia inmunológica hacia mismo.Por este motivo, en la actualidad, el análisis de la inmunogenicidad de proteínas de uso terapéutico constituye un punto crítico en el proceso de control de calidad. Más aun, en las últimas guías publicadas por la Food and Drug Administration (FDA) y la European Medicines Agency (EMA) en Estados Unidos y Europa respectivamente, se establece la importancia de llevar a cabo este tipo de análisis como parte del estudio de la seguridad del producto. A pesar de esto, son escasos los centros tecnológicos dedicados a realizar tal determinación.Una consecuencia muy frecuente de la administración prolongada de las proteínas recombinantes de uso terapéutico es que, en algunos pacientes, se desarrollan anticuerpos anti-droga. En general, los pacientes presentan una mezcla de anticuerpos neutralizantes y no neutralizantes. Los primeros impiden la unión de la proteína a su receptor o molécula target y pueden ocasionar efectos indeseados diversos, tales como una reducción de la eficacia del fármaco y/o la aceleración de la progresión de la enfermedad.Diversos factores que conducen a la generación de anticuerpos neutralizantes han sido descriptos. Estos se dividen principalmente en dos grupos: - Factores extrínsecos: ruta de administración, dosis, formulación, agregados, glicosilación y contaminantes. - Factores intrínsecos: la presencia de epitopes inmunogénicos que conducen a la formación de anticuerpos.Los primeros factores han sido resueltos satisfactoriamente en la mayoría de los casos, por medio de un cuidadoso proceso productivo, así como mediante mejoras en la etapa de purificación. Contrariamente, los factores intrínsecos constituyen un verdadero desafío, ya que la activación de linfocitos B puede dar lugar al desarrollo de anticuerpos, incluso en aquellos casos en los que el terapéutico es prácticamente idéntico a la proteína autóloga. Además del análisis de la respuesta inmune mediada por anticuerpos, resulta importante evaluar el comportamiento de los linfocitos T potencialmente reactivos contra la droga. Estas células, una vez activadas, secretan mediadores inflamatorios (citoquinas) capaces de activar otras células del sistema inmune y amplificar así la magnitud de la respuesta. En líneas generales, el análisis de la inmunogenicidad de proteínas de uso terapéutico humano debe realizarse con una evaluación a nivel global de la molécula, empleando para tal fin células mononucleares de sangre periférica humana (u otras células del sistema inmune) como así también ratones transgénicos. Estos últimos expresan exclusivamente moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad humano y presentan, por lo tanto, una buena correlación con respecto a la respuesta inmune in vivo.En general, este tipo de estudios se llevan a cabo en forma comparativa, permitiendo establecer diferencias (si las hubiese) entre el producto de referencia y un biosimilar o entre distintos lotes del mismo producto.En particular, en nuestro laboratorio hemos desarrollado una plataforma de análisis de la inmunogenicidad de proteínas de uso terapéutico basada en el uso de células mononucleares de sangre periférica humana. Brevemente, dicho protocolo consiste en aislar células dendríticas humanas, que son luego incubadas con la proteína terapéutica de interés. En esta etapa, dichas células incorporan la proteína y la degradan generando múltiples péptidos que son luego expuestos en la membrana celular. Posteriormente, dichas células dendríticas son incubadas con linfocitos T autólogos. Finalmente, la activación linfocitaria es evaluada mediante la cuantificación de citoquinas específicas en el sobrenadante de cultivo.Mediante el empleo de dicha metodología se llevó a cabo el análisis de la inmunogenicidad del IFN-alfa-2b producido en células CHO. Los resultados alcanzados fueron similares a los observados en ensayos clínicos llevados a cabo con dicha molécula.Teniendo en cuenta los elevados costos asociados a los ensayos clínicos, la necesidad de contar con estrategias que permitan evaluar tal característica en una etapa pre-clínica del control de calidad del producto resulta evidente. Esto pone de manifiesto la utilidad de la metodología propuesta para la evaluación de la inmunogenicidad de las proteínas de uso terapéutico humano.En este sentido, actualmente, estamos empleando tal estrategia para analizar la inmunogencidad del IFN-β y de una versión hiperglicosilada del IFN-alfa-2b.

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