OPTIMIZACIÓN DEL PROCESO DE GENERACIÓN DE LÍNEAS Y CLONES CELULARES PRODUCTORES DE rhFVIII

AGUSTINA GUGLIOTTA; MARÍA DE LOS MILAGROS BÜRGI; CAROLINA ATTALLAH; EDUARDO MUFARREGE; DIEGO FONTANA; SEBASTIÁN ANTUÑA; ALEJANDRO RAIMONDI; MARIA BELÉN TARDIVO; MARINA ECHEVERRIGARAY; RICARDO KRATJE; CLAUDIO PRIETO

La Plata

Congreso; II Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2012

Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de la Plata

El factor de coagulación VIII (FVIII) es una glicoproteína compleja de alto peso molecular compuesta por dos cadenas de polipéptidos: la cadena liviana de 80 kDa y la cadena pesada de 90 kDa. Ambas derivan de un péptido simple cadena (170 kDa) que conforma dicho heterodímero. El FVIII participa en la cascada de coagulación de la sangre, como co-factor del factor IXa, en la activación del factor X. La producción deficiente de FVIII funcional resulta en un trastorno hemorrágico grave ligado al cromosoma X, conocido como hemofilia A. Este desorden hematológico afecta a uno de cada cinco mil hombres y se manifiesta con episodios de sangrado espontáneos. Inicialmente, el tratamiento de la hemofilia A se realizaba empleando  FVIII purificado a partir de plasma humano como agente terapéutico. Sin embargo, la presencia de contaminantes potencialmente peligrosos para los pacientes en tratamiento, condujo al desarrollo y producción del FVIII humano recombinante (rhFVIII). Las células animales constituyen el huésped de elección para la producción de esta glicoproteína compleja, debido a la importancia de sus modificaciones post-traduccionales. Sin embrago, el empleo de células animales se caracteriza por presentar condiciones de cultivo muy específicas, demandas de nutrientes exigentes y baja productividad de la proteína de interés, con respecto a los sistemas bacterianos. Además, teniendo en cuenta que el rendimiento de rhFVIII a partir del cultivo de células CHO es de 2 o 3 órdenes de magnitud menor comparado con otras proteínas de tamaño similar, resulta de gran interés desarrollar metodologías que permitan obtener clones celulares con elevada expresión. Es por esto que, se han desarrollado en nuestro laboratorio líneas y clones celulares con elevada productividad. Se emplearon vectores lentivirales de tercera generación como sistemas de transferencia de material genético, los cuales son capaces de transducir células tanto en fase de división como de no-división, y sostener la expresión del transgen durante períodos prolongados de tiempo. Además, se evaluó la incidencia del número de células a transducir y el número de eventos de transducción.