CARACTERIZACIÓN DE NUEVAS LÍNEAS CELULARES ANIMALES OPTIMIZADAS PARA LA SOBRE-EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES DE USO TERAPÉUTICO

EDUARDO MUFARREGE; EVANGELINA BENIZIO; FABRICIO CHIAPPINI; MARINA ECHEVERRIGARAY; RICARDO KRATJE; CLAUDIO PRIETO

Valparaíso

Congreso; Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivo de Células; 2014

La optimización de un proceso de producción de proteínas recombinantes, que emplea células animales como plataforma, se puede llevar a cabo mediante la manipulación de cuatro componentes esenciales: los vectores de expresión, la célula productora, el sistema y el medio de cultivo. En particular, en este trabajo se ha desarrollado una estrategia de ingeniería celular que se basa en la sobre-expresión de la proteína P (por razones de confidencialidad) involucrada en la regulación de la expresión génica a nivel post-transcripcional en las células CHO-K1 (Chinese Hamster Ovary) y HEK-293T (Human Embryonic Kidney). Las líneas transgénicas fueron obtenidas mediante una estrategia de lipofección y los clones correspondientes fueron generados por medio del método de dilución límite. La selección clonal se llevó a cabo a partir de la capacidad para expresar la proteína reportera eGFP (enhanced Green Fluorescent Protein). A partir de este proceso de selección se lograron identificar clones de alto, medio y bajo niveles de expresión. Luego, se corroboró la presencia del transgen P mediante ensayos de RT-qPCR y Western Blot. Finalmente, se caracterizaron las líneas y clones celulares mediante el estudio de la morfología, crecimiento, metabolismo celular y productividad específica de proteínas recombinantes humanas de interés biotecnológico, tales como interferón alfa 2b (rhIFN-alfa-2b) y eritropoyetina (rhEPO). De esta manera, se encontró que los clones recombinantes mostraron niveles de productividad específica de hasta tres veces superiores a los alcanzados por las células no modificadas y presentaron, además, características interesantes desde el punto de vista de la performance del cultivo. Por estos motivos, la estrategia de optimización desarrollada en el presente trabajo resulta sumamente promisoria para su aplicación en un proceso productivo de proteínas de uso terapéutico humano a escala industrial.