Utilización de diferentes análisis de datos para estudiar la viabilidad y adhesión en células madre mesenquimales de conejo sobre cubiertas biomiméticas

D'ELÍA NOELIA LAURA; MATHIEU COLLEENE; HOEMANN CAROLINE; GRAVINA ANABELA NOEL; SARTUQUI JAVIER; MESSINA PAULA VERÓNICA

Sierra de la Ventana

Encuentro; XXXII Reunión Anual Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2015

AAOMM

Se sembraron células madre mesenquimales de conejo (rMSC) sobre cubiertas formadas por diferentes proporciones de hidroxiapatita/colágeno tipo I (HA/CoI), en un intento de imitar el entorno de remodelación ósea en el que se adhieren y diferencian. El material de HA se obtuvo previamente en el laboratorio y seencuentra extensamente caracterizado; está compuesto por nanopartículas con características fisicoquímicas similares a las de la matriz mineral ósea y la topografía submicrométrica. Recientemente se demostró que un aumento en la expresión de la proteína α-actina de músculo liso (α-SMA) se asocia con el potencial osteogénico de las MSC y se encuentra relacionado con su diferenciación a osteoblastos. Además, se sabe que la organización del citoesqueleto celular, incluyendo la ubicación de los filamentos de actina, es sensible a la topografía del material. Por lo tanto, durante este estudio se analizó la adhesión de rMSC sobre recubrimientos biomiméticos de HA/CoI con las mismas proporciones que se encuentran en la matriz inorgánica/orgánica del tejido óseo. Se realizaron ensayos de inmunodetección de la proteína α-SMA, se contabilizó el número de células adheridas mediante la utilización del reactivo de Hoechst y además se determinó la actividad metabólica celular mediante MTT. Las imágenes obtenidas por microscopia láser confocal mostraron que las células adheridas sobre las distintas coberturas presentaban una morfología poligonal y además se observó la presencia de extensiones citoplasmáticas típica de las MSC. Las células se adhirieron homogéneamente sobre los recubrimientos biomiméticos donde se utilizaron cantidades de HA entre 15 y 62 μg/cm2 más 31 μg/cm2 de CoI. El análisis semicuantitativo de las imágenes obtenidas por microscopia confocal mostraron que la expresión de la proteína α-SMA no varió en comparación con las muestras control.Además, la actividad metabólica mitocondrial no se vio afectada (p>0,10). Por otro lado, las células sembradas sobre coberturas en las cuales se utilizaron cantidades cien veces más grandes de HA presentaron aspecto redondeado, con menos prolongaciones citoplasmáticas, por lo tanto la adhesión y la actividadmetabólica se vieron inhibidas (p