Interacción entre Factores Bromodominio (TcBDF) e Histonas en Trypanosoma cruzi. Villanova, G.V y Serra E.

VILLANOVA, GABRIELA VANINA,; SERRA ESTEBAN

Huerta Grande

Congreso; ¨XXI Reunión Anual Sociedad Argentina De Protozoología; 2006

Sociedad Argentina de Protozoología

    La regulación de la estructura de la cromatina establece un mecanismo epigenético para controlar la expresión génica. Ocurre de dos maneras: remodelamiento dependiente de ATP y modificación covalente de histonas. Varios complejos de HAT, así como factores de remodelamiento, presentan uno o más bromodominios, dominio conservado que une específicamente lisinas acetiladas, principalmente de histonas, cuya función estaría relacionada con la activación transcripcional. Poco se conoce sobre la regulación de la estructura de la cromatina en tripanosomátidos. Se han descripto modificaciones durante el ciclo de vida de T.cruzi y durante el ciclo celular de epimastigotes. En los genomas de tripanosomátidos, se encuentran secuencias codificantes para metiltransferasas, HAT, HDAC, factores bromodominio y helicasas. Recientemente se han informado modificaciones covalentes en las histonas. Todo esto ha llevado a proponer el remodelamiento de la estructura de la cromatina como un mecanismo importante de regulación de la expresión génica en tripanosomátidos.             En nuestro laboratorio estamos interesados en el rol de los factores bromodominio en la regulación de la trascripción y de la estructura de la cromatina en T.cruzi. Analizamos la presencia de TcBDF1, 2 y 3 en epimastigotes, por ensayos de WB e inmunofluorescencia, lo que evidenció la presencia de TcBDF2 en el núcleo de epimastigotes en cultivo, no asi de TcBDF1 y 3, lo que sugeriría una expresión diferencial. Analizamos la presencia TcBDF2 en complejos proteicos utilizando el sistema Tap-tag. Los complejos se purificaron por cromatografía de afinidad en tandem y las proteínas eluídas se evidenciaron por SDS-PAGE. La capacidad de unión a histonas acetiladas, se estudió mediante FarWB utilizando histonas purificadas por extracción ácida y TcBDFs recombinantes fusionados a histidinas o GST. Los resultados mostraron patrones de interacción diferentes para los tres TcBDFs.