Proteínas de la familia “High Mobility Group” en Trypanosoma cruzi: Estructura de la cromatina y procesos nucleares.

CRIBB PAMELA; PEROZZI MARINA; VILLANOVA GABRIELA VANINA; SERRA ESTEBAN

Santa Fe

Congreso; XXIII Reunión científica anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2009

Sociedad Argentina de protozoología

Las modificaciones en la estructura de la cromatina y su efecto sobre los distintos procesos nucleares han adquirido gran protagonismo en los últimos años. En tripanosomátidos, la posibilidad de un control transcripcional basado en mecanismos epigenéticos es de particular importancia debido a la ausencia de promotores y reguladores transcripcionales clásicos. Los genomas de Tri-Tryp contienen secuencias codificantes para metil-transferasas, acetil-tyransferasas, desacetilasas y, factores con bromodominios, que podrían ser responsables de las modificaciones postraduccionales observadas en las histonas, y de algún tipo de regulación epigenética. Recientemente, algunas de las funciones de estas enzimas han sido caracterizadas en T. brucei, y se han observado cambios en la estructura de la cromatina, durante el ciclo de vida de T. cruzi y de T. brucei, asi como durante el ciclo celular de epimastigotes en cultivo. En nuestro laboratorio se han identificado distintas proteínas de T. cruzi con posibles funciones relacionadas con la estructura de la cromatina TcBDF2 es una proteína nuclear con bromodominio, un dominio de unión a lisina acetilada presente en complejos con actividad histona-acetil transferasa, factores de transcripción y/o reguladores de la estructura de la cromatina. TcBDF2, se une a las histonas H2A y H4 acetiladas y se acumula durante la irradiación con UV, lo que sugiere que podría formar parte de un complejo remodelador de la cromatina y estar implicada en los procesos que median la reparación del daño al ADN. TcHMG-B pertenece a la familia de proteínas “High Mobility Group” (HMG), componentes abundantes de la cromatina capaces de distorsionar, curvar o modificar la estructura del ADN en la cromatina. Estas proteínas pueden presentar tanto funciones genómicas globales en el establecimiento de dominios de cromatina activa e inactiva, como funciones de control específico sobre un número limitado de genes. TcHMG-B y sus ortólogas de T. brucei y Leishmania, tienen dos dominios “HMG box” al igual que las HMG-Bs de mamíferos. Las HMG-Bs de tripanosomátidos carecen de la región acídica C-terminal típica de las HMG-Bs y, en cambio, presentan una región N-terminal de unos 110 aminoácidos ausente en otros organismos. Ensayos de “Western Blot” e inmunofluorescencia demostraron que la proteína se expresa en el núcleo de epimastigotes, tripomastigotes y amastigotes de T. cruzi. La sobreexpresión de TcHMG-B en epimastigotes de T. cruzi utilizando el vector pTREX, produce parásitos con formas aberrantes que presentarían dificultades durante la división celular ya que se observaron parásitos con más de un flagelo y una relación anómala de núcleo/kinetoplasto. Si bien, los transfectantes se lograron seleccionar, los cultivos de las cepas que sobreexpresan TcHMG-B, tienen una velocidad de crecimiento menor que los controles y luego de algunas semanas mueren. Por otra parte, TcHMG-B, al igual que otros componentes de la familia de HMGs, es capaz de producir una curvatura en el ADN, sugiriendo que también en T.cruzi, esta proteína jugaría un rol estructural, pudiendo modificar a la cromatina globalmente o de manera puntual y así afectar procesos fundamentales como la transcripción, la replicación y la reparación del ADN.