Evaluación del efecto genotóxico producido por exposición in vivo a pesticidas y a mezclas en Caiman latirostris, evidenciado por los ensayo cometa

ROMITO MARÍA LAURA; LÓPEZ GONZÁLEZ EVELYN C.; MOLEÓN MARÍA SOLEDAD; SIROSKI PABLO A.; POLETTA GISELA L.

Esperanza

Jornada; IV Jornadas de Difusión de la Investigación y Extensión de la FCV; 2016

Facultad de Cs. Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

Las actividades humanas generan una continua descarga de agroquímicos en el medio ambiente, principalmente asociados a cultivos transgénicos, independientemente de su persistencia, bioacumulación y toxicidad. Caiman latirostris (yacaré overo) es un importante representante de los humedales del noreste argentino, región que se caracteriza por una gran actividad agrícola en nuestro país. El objetivo de este trabajo fue evaluar el potencial efecto genotóxico de diferentes pesticidas y mezclas ampliamente utilizados en agricultura sobre juveniles de C. latirostris, utilizando el ensayo cometa (EC). Se utilizaron 132 animales pertenecientes a seis nidos recolectados en el marco de las actividades de rancheo del Proyecto Yacaré (Gob. de Santa Fe/MUPCN) y se distribuyeron en 11 grupos experimentales -GE- (12 animales por GE en dos réplicas de 6 cada uno): un control negativo (CN) tratado con agua destilada, un control vehículo (CV) tratado con etanol, dos grupos expuestos a diferentes concentraciones de la formulación de Endosulfan (END1 y END2), dos expuestos a formulación de Cipermetrina (CIP1 y CIP2), dos expuestos a formulación de glifosato Roundup Full II (RU1 y RU2), dos expuestos a formulación de glifosato PANZER GOLD® (PANZ1 y PANZ2) y un grupo expuesto a la mezcla (M) de tres formulaciones a la concentración más baja: END1 + CIP1 + RU1.Se llevó a cabo una exposición sub-crónica por inmersión, durante dos meses, en bateas plásticas inclinadas para proveer una superficie seca y una superficie con agua, donde se colocaron los plaguicidas disminuyendo las concentraciones progresivamente en el tiempo, para simular la degradación de los compuestos en agua, previamente determinada por cromatografía gaseosa en el caso de END y CIP y por HPLC para glifosato1. Las concentraciones iniciales y finales para los tratamientos 1 y 2 de CIP y END estuvieron en los rangos 0,5µL-0,05µL y 1µL-0,01µL, respectivamente. En cuanto a las formulaciones de glifosato, las concentraciones iniciales y finales. Para los tratamientos 1 y 2 fueron de 2,5mg/L-0,25mg/L y de 5mg/L-0,5mg/L, respectivamente.Los animales fueron medidos (LT: longitud total y LHC: longitud hocico-cloaca, precisión 0,5cm) y pesados (precisión 0,1g) al inicio y final de la experimentación para determinar el crecimiento en cada GE. Una vez finalizado el experimento se tomaron muestras de sangre (0,5ml) de la vena espinal de cada animal con jeringas estériles heparinizadas.En todas las muestras de sangre se determinó la viabilidad celular y luego se aplicó el EC en eritrocitos de sangre periférica, por duplicado, según la técnica previamente adaptada para la especie2.Las muestras fueron observadas en microscopio de fluorescencia a 400X y utilizando naranja de acridina como colorante. Se analizaron visualmente 100 células por animal (50 por cada réplica), y se clasificaron en cinco categorías arbitrarias de daño teniendo en cuenta longitud de la cola e intensidad de fluorescencia, desde la clase 0 (sin daño) hasta la clase 4 (máximo daño). Se calculó el índice de daño (ID) para cada muestra mediante la fórmula: ID = n1 + 2n2 + 3n3 + 4n4, donde n es el número de células en las categorías de daño 1, 2, 3 y 4, respectivamente.La viabilidad celular de todas las muestras fue del 95-100% lo que indicó condiciones propicias para la aplicación del ensayo. Los resultados del EC demostraron que los pesticidas inducen un incremento significativo en el índice de daño en los animales expuestos a CIP 1 y 2, END 1 y 2 y RU 1 y 2, comparados con el CN (p