Isolation and characterization of bacterial isolates recovered from surface sterilized alfalfa (Medicago Sativa) seeds

LÓPEZ, JOSÉ; GIUSTI, M. ANGELES; MARTINI, M. CARLA; SALAS, M. EUGENIA; LOZANO, MAURICIO; DEL PAPA, M. FLORENCIA; PISTORIO, MARIANO; LAGARES, ANTONIO

Mar del Plata

Congreso; VII congreso de microbiología general; 2012

SAMIGE

Las interacciones microorganismo-planta son desde hace más de una centuria foco de atención, derivado del carácter ya sea mutualista o patogénico de las mismas. En la actualidad el uso de microorganismos benéficos como biofertilizantes con propósitos de biocontrol y/o promoción del crecimiento, es una práctica creciente que, de manera natural, mejora los rendimientos de los cultivos y es compatible con las prácticas agrícolas intensivas. Así, además del empleo de rizobios fijadores de nitrógeno aplicables a las leguminosas con las que se asocian; el uso de biofertilizantes se extiende cada vez con más intensidad a la aplicación de distintos microorganismos que, desde la rizósfera o como endófitos, mejoran la sanidad y/o el crecimiento vegetal. Tales microorganismos, como es esperable, conviven en los ambientes naturales con las plantas que colonizan y de las que han sido aislados. Un punto de especial interés refiere al hecho de que, más allá de los microorganismos que desde el suelo puedan colonizar la planta, las propias semillas son en varios casos portadoras (en su interior) de una diversidad microbiana importante cuyo rol en las etapas tempranas del crecimiento vegetal no ha sido aun estudiado en detalle. Como parte de los estudios vinculados a la microbiota asociada a alfalfa que realizamos en nuestro laboratorio, hemos comenzado a investigar la diversidad bacteriana presente en el interior de las semillas de esta especie en las que sólo se ha reportado la existencia de Erwinia herbicola (@). Para investigar en una primera instancia la presencia de bacterias cultivables dentro de semillas de alfalfa (variedad Monarca -INTA), las mismas fueron esterilizadas superficialmente 10 min. con hipoclorito de sodio (9 g Cl2/l) o 10 min. con ácido sulfúrico oleoso (98% P/P); lavadas luego con agua esteril y PBS pH =7; y las bacterias liberadas luego de 4 hs en PBS analizadas por plaqueo en medios ricos agarizados (LB, TSA, ELM). La amplificación por PCR y posterior secuenciamiento de una región parcial del rDNA 16S realizado a partir de diferentes aislamientos obtenidos de las semillas reveló la presencia de los siguientes géneros: Arthrobacter, Bacillus, Enhydrobacter, Janibacter, Kokuria, Microbacterium, Moraxella, Paenibacillus, Rhizobium, Sphingomonas, y Streptomyces. Por otra parte, bacterias de 6 de estos generous pudieron ser recuperados ya sea de la raíz o de la parte aérea de de plantas de alfalfa crecidas en vermiculita con medio mineral, sugiriendo que las propias semillas pueden haber sido la fuente de las bacterias endófitas con que fueron colonizadas. La mayoría de las bacterias presentes en la parte aérea también fueron recuperadas de raíces y de semillas. Bacterias de los generous Corynebacterium, Exiguobacterium, and Flavobacterium pudieron ser solo aisladas de raíces. En clones representantes de los diferentes géneros que colonizan alfalfa hemos comenzado a investigar si los mismos expresan características fenotípicas asociadas a la promoción del crecimiento vegetal y al biocontrol.