PERSONAL DE APOYO
BURDISSO Paula
congresos y reuniones científicas
Título:
Los dominios dsRBD de DCL1 de Arabidopsis thaliana
Autor/es:
SUAREZ, IRINA; BURDISSO, PAULA; PALATNIK, JAVIER F.; RASIA, RODOLFO M.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Sociedad Argentina de Biofísica (SAB); 2011
Resumen:
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Los dominios de
unión a ARN doble hebra de DCL1 de A. thaliana
I.P. Suarez,
P. Burdisso, J.F. Palatnik, R.M. Rasia
Instituto
de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR-CONICET) y Facultad
de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas UNR, Rosario, Argentina,
isuarez@ibr.gov.ar
La
biogénesis de pequeños ARNs es un proceso complejo que involucra
ribonucleasas tipo III de la familia Dicer1.
En A.
thaliana
una de estas enzimas, DCL1, realiza el procesamiento de miARN
produciendo los dos cortes necesarios para escindir con precisión el
miARN maduro de su precursor, pri-miRNA2.
El reconocimiento del sustrato es llevado a cabo por los dominios de
unión a ARN de la proteína. La proteína DCL1 se diferencia de las
proteínas Dicer canónicas por la presencia de un segundo dominio de
unión a ARN doble hebra en el dominio C-terminal (DCL1-dsRBD2)3.
Para
comprender el reconocimiento del ARN por DCL1 estudiamossus dos dominios de
unión a ARN doble hebra (dsRBDs), localizados en la región
C-terminal de la proteína. Produjimos varias construcciones
diferentes sobre la región C-terminal de DCL1. De la construcción
que expresa DCL1-dsRBD2 se obtiene una proteína bien plegada. Hemos
asignado las resonancias del esqueleto de la proteína HN, Ha, N, C´,
CA y CB y adquirimos datos de Acoplamientos Dipolares Residuales
(RDC) en fase anisotropica C12E5/hexanol. Las restricciones
orientacionales fueron usadas para calcular el plegamiento de la
proteína, que presenta diferencias significativas en comparación
con dsRBDs canónicos: una inserción en el loop beta2-beta3 y un
cambio en la orientación de la hélice 1. Para DCL1-dsRBD1
produjimos cuatro construcciones incluyendo el dominio aislado y el
dominio junto a regiones vecinas. El análisis de los espectros
1H-15N
HSQC muestra que el dominio está intrínsecamente desordenado en
todas las construcciones. Hemos explorado distintas condiciones de
solución y aditivos para probar cuál podría llevar al dominio a
adquirir una estructura plegada, y encontramos evidencia de que esto
sucede en presencia de ARN.
Referencias:
Rana
TM. Nat Rev Mol Cell Biol 8, 23-36 (2007)
Xie
Z, Khanna K, and Ruan S. Semin Cell Dev Biol 21, 790-797 (2010)
Margis
R, Fusaro AS, Smith NA, Curtin SJ, Watson JM, Finnegan EJ,
Waterhouse PM. FEBS Letters 580, 2442-2450 (2006)