DESARROLLO DE UN PROTOCOLO DE INFECCIÓN DE UNA LÍNEA CELULAR MACROFÁGICA HUMANA CON TRYPANOSOMA CRUZI (T. cruzi).

PERDOMO, VG; NOCITO I; CATANIA, VA; ECHENIQUE, CG

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

Los macrófagos presentes en el sitio de entrada del protozoo flagelado T. cruzi, son unas de las primeras células en ser invadidas. Sin embargo, existen pocos modelos que permitan estudiar los mecanismos de infección de T. cruzi en este tipo celular. OBJETIVO: desarrollar un nuevo modelo de infección de macrófagos humanos con T. cruzi. METODOLOGÍA: inicialmente se estandarizó un protocolo de diferenciación a macrófagos de la línea celular THP-1 (derivada de leucemia monocítica humana) co-incubándolas con vitamina D3 (100 nM) y vitamina A (100 nM) durante 72 hs o con 12-miristato-13-acetato forbol (PMA, 5 y 20 ng/ml) durante 24 y 48 hs en medio RPMI. El estado de diferenciación se comprobó a través de su adhesión a la placa, cambios de morfología y ensayo de fagocitosis utilizando Cándida tropicalis. La integridad celular se comprobó con un ensayo de inmunofluorescencia, marcando el núcleo celular con DAPI y los filamentos de actina con faloidina. Se aceptó el protocolo de diferenciación con PMA (20 ng/ml, 24 hs). Células diferenciadas se pusieron en contacto con tripomastigotes de la cepa T. cruzi Brazil, en distintas relaciones célula-tripomastigotes (1:2, 1:5, 1:10) durante 24 hs. Posteriormente se renovó el medio y se controló la progresión de la infección durante 48 y 72 horas. Finalmente se realizó una coloración de Giemsa para la cuantificación celular. RESULTADOS: las células infectadas se lisan espontáneamente a las 72 hs post-infección, indicando una gran replicación de los amastigotes en este tipo celular. Se observó a las 48 hs la presencia de amastigotes en todas las relaciones celulares. La proporción de células infectadas a las 48 hs fue de 35 %, 64 % y 71 % respectivamente para cada relación. La cantidad de amastigotes por célula infectada estuvo directamente relacionada con la proporción célula-tripomastigotes (13 ± 3; 22 ± 7 y 26 ± 4, respectivamente, n = 4; donde la relación 1:2 difirió significativamente de 1:10; p