La exposición a Bisfenol A, ¿modifica la involución de la Glándula Mamaria de la rata?

VIRGINIA PERDOMO; VERÓNICA BOSQUIAZZO; MILENA DURANDO

SANTA FE

Congreso; Undécimo encuentro de Jóvenes Investigadores Universidad Nacional del Litoral y Segundo Encuentro de Jóvenes Investigadores Universidades de Santa Fe.; 2007

Universidad Nacional del Litoral y Universidades de Santa Fe.

Introducción: Los perturbadores endocrinos (PE) son sustancias con la capacidad de imitar y/o antagonizar la acción de las hormonas y en consecuencia, de modificar la respuesta a las hormonas endógenas. Numerosas sustancias naturales o sintéticas, presentes en el ambiente se comportan como PE. La exposición humana a estos compuestos podría producir alteraciones similares a las observadas en animales y ser los responsables del aumento en la incidencia de tumores hormonodependientes tanto en mujeres como en varones (cáncer de mama, próstata, testículo) como así también, del adelantamiento de la pubertad en las niñas y la disminución de calidad y cantidad espermáticas. El Bisfenol A (BPA) es un PE utilizado en la manufactura de policarbonatos plásticos y resinas epoxi, selladores dentales y barnices. Por exposición al calor (ej: autoclavado, horno de microondas), el BPA se libera de los envases plásticos de alimentos y bebidas (ej: mamaderas), y de la pintura que recubre el interior de las latas de conserva. Los selladores odontológicos liberan BPA a la saliva durante el proceso de polimerización. En trabajos previos observamos, en las ratas hembras, diversos efectos de la exposición prenatal a BPA, entre ellos: aumento en la distancia ano-genital durante el desarrollo postnatal temprano, alteración de la ganancia de peso corporal durante la lactancia y modificaciones en la histoarquitectura mamaria y recambio celular por desbalance en la relación proliferación/apoptosis. Sin embargo, no se advirtieron cambios significativos sobre la conducta sexual ni la funcionalidad de la glándula mamaria (GM). El desarrollo de la GM es un proceso complejo regulado principalmente por las hormonas esteroides ováricas (estrógenos y progesterona) y por prolactina. Los cambios hormonales que se dan durante el ciclo estral en la rata adulta, controlan el crecimiento y remodelación de la GM en cada ciclo. Sin embargo, la diferenciación completa de la GM se alcanza durante la gestación, cuando las células y estructuras mamarias maduran para producir y secretar los componentes de la leche. Después del destete, la acumulación de leche en la luz de las estructuras mamarias secretoras y en el citoplasma de las células epiteliales lactogénicas tiene un efecto inhibitorio sobre la futura síntesis de leche y promueve la involución mamaria. El proceso de involución se caracteriza por la presencia de gran cantidad de células epiteliales en apoptosis e infiltración de macrófagos en el tejido mamario, que contribuyen a la remodelación del mismo por fagocitosis de dichas células. Objetivo: Evaluar si: a) en la rata adulta la exposición a BPA, a lo largo de la preñez, afecta los mecanismos involucrados en la involución mamaria después del destete; b) la exposición prenatal a BPA tiene efectos a largo plazo que se evidencien durante la involución de la GM post-destete. Materiales y Métodos: Animales. Se utilizaron ratas hembras adultas de la cepa Wistar mantenidas en un ambiente controlado de luz (desde las 6:00 hasta las 20:00) y temperatura (22 ± 2 ºC) con libre acceso a alimento y agua (suministrada en botellas de vidrio). Diseño experimental (Fig. 1). Hembras adultas en proestro se aparearon con machos de fertilidad comprobada. El día 1 de gestación (DG1) fue establecido por la presencia de espermatozoides en el extendido vaginal. Las hembras preñadas (F0) se separaron en 2 grupos (controles y tratadas). En el DG8 (período crítico del comienzo de la organogénesis de la GM de las crías) se les implantó en forma subcutánea bombas micro-osmóticas (Alzet, Cupertino, CA, modelo 1002), que liberan 0.25 μl/h de solución, durante 14 días, garantizando una descarga continua tanto de BPA (25 μg/kg/día- Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) como de vehículo dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma-Aldrich), hasta el final de la preñez (DG23). Una vez que las hijas (F1- expuestas prenatalmente a DMSO o BPA) alcanzaron los 90d se aparearon con machos de fertilidad comprobada y no expuestos a BPA. Al igual que en F0, se verificó la presencia de espermatozoides en el extendido vaginal en el DG1. En todos los animales el parto ocurrió el DG23. El día 21 de lactancia se destetaron las crías. Las hembras (F0 y F1) fueron sacrificadas a los 2, 5, 8 y 10 días post-destete (dpd). Se analizaron las GM de 4 a 6 animales por grupo. Evaluación de apoptosis e infiltración de macrófagos. Se extrajo la GM N°4, se fijó en una solución de formalina tamponada, y se procesó e incluyó en parafina. En cortes de 5 µm se evaluó apoptosis por la técnica de TUNEL y macrófagos por inmunohistoquímica, utilizando un anticuerpo específico (clon ED1, Serotec Ltd., Oxford, UK). El índice de apoptosis (IA) se cuantificó como células epiteliales TUNEL (+)/células epiteliales totales x 100. La infiltración de macrófagos se cuantificó utilizando una grilla inserta en el ocular del microscopio y determinando la fracción de volumen: Vv = Pi/P x 100, siendo: Pi el número de puntos incidentes sobre macrófagos y P, el número de puntos incidentes sobre el órgano completo (GM). Figura 1: Diseño experimental Análisis estadístico: los datos obtenidos se analizaron utilizando el test no paramétrico de Mann-Whitney U. Un valor de p menor a 0,05 se consideró como estadísticamente diferente. Resultados: Los resultados obtenidos pueden observarse en la Figura 2:Determinación de IA e infiltración de macrófagos en GM. El IA en la GM de hembras expuestas a BPA durante la gestación no se modificó significativamente a los 2, 5 y 8 dpd; sin embargo se evidencia un enlentecimiento en la involución que se compensa a los 10 dpd con un aumento significativo respecto del grupo control (a). En las hembras expuestas in utero a BPA, el IA no se modificó a lo largo del período evaluado (b). La infiltración de macrófagos en la GM no se vio afectada, independientemente del estadío y la vía de exposición a BPA (c y d). Las barras representan el valor promedio ± SEM. Conclusiones: Previamente observamos que la exposición in utero a BPA produce una disminución en el IA de la GM de ratas ciclando (50d). Sin embargo, la involución de la GM post-destete, proceso en el cual la apoptosis cumple un rol fundamental, no se vio afectada por la exposición a BPA tanto durante la preñez que precedió a esa lactancia como a largo plazo en hembras que fueron expuestas prenatalmente. Sólo se puede sugerir un enlentecimiento en la involución de la GM en las hembras F0 que sería compensado el día 10 post destete. Por otra parte, no se observaron diferencias en el reclutamiento de macrófagos. Los resultados sugieren que el PE administrado no modifica el balance entre involución y remodelación mamaria y que, finalizada la lactancia, la GM retorna a un estadío semejante al que tenía previo a la preñez. En base a estos resultados y a los previamente publicados, concluimos que los PE pueden generar cambios muy diversos en un mismo órgano (como la GM) y que dichos cambios dependen no sólo de la dosis, sino también de la vía y momentos de exposición.