Un eficiente y práctico método para la metaciclogénesis in vitro de Trypanosoma cruzi.

BOSELLI VICTORIA; PERDOMO VIRGINIA; MANARIN ROMINA; SERRA ESTEBAN

Rosario

Congreso; XXIV Congreso y XLII Reunión Anual de la SBR; 2022

Sociedad de Biología de Rosario

Durante su ciclo de vida, T. cruzi alterna entre huéspedes vertebrados e invertebrados (triatominos). La metaciclogénesis, proceso esencial que ocurre dentro del triatomino, capacita al parásito para infectar con éxito al huésped vertebrado. Este proceso es inducido por distintos factores, tales como: estrés nutricional, contenido de hemo, procesos de adhesión, osmolaridad, pH, entre otros. Hasta ahora, el medio TAU es el más utilizado para inducir in vitro el proceso de metaciclogénesis en condiciones químicamente definidas. Sin embargo, produce bajas concentraciones de tripomastigotes metacíclicos cuando los parásitos han sido cultivados artificialmente durante largos períodos de tiempo. En el presente trabajo nos propusimos optimizar el proceso de metaciclogénesis in vitro analizando diferentes condiciones de cultivo. Brevemente, epimastigotes de T. cruzi, cepa Dm28c, se mantuvieron durante 7 días en la fase de crecimiento exponencial a 28°C (medio LIT pH:7, 10% SFB). Luego, se cultivaron durante 12 días a 28°C con medios: M16, LIT o TAU a distintos pH: 4, 5 o 6 (Ci: 5x106 parásitos/ml). Durante este período, se cuantificó el porcentaje de metaciclogénesis en cámara de Neubauer (tripomastigotes metacíclicos*100/parásitos totales). Se evaluó además la capacidad de los tripomastigotes metacíclicos obtenidos para infectar células Vero (MOI: 10:1, 24 hs), cuantificando la tasa de infección y liberación de tripomastigotes entre los 4 y 5 días post-infección. En los resultados, se obtuvieron mayores tasas de metaciclogénesis utilizando medio LIT y M16 a pH: 6 (LIT:58±13; M16:38±4; TAU:5±3, p