TcBDF6: una proteína imprescindible para la infectividad de T.cruzi.

BOSELLI, VICTORIA; ESTEBAN SERRA; PERDOMO, VIRGINIA

Mendoza

Congreso; XI Congreso SAP; 2022

Sociedad Argentina de Proteozoología

La acetilación de proteínas en residuos de lisinas, es una modificación postraduccional dinámica, que regula diversas funciones de las proteínas. El único dominio conocido capaz de reconocer lisinas acetiladas es el bromodominio (BD), que funciona como un andamio para el ensamblaje de complejos macromoleculares. En Trypanosoma cruzi, existen 7 secuencias codificantes con BD en T. cruzi: TcBDF1-7. Debido a que sus secuencias son muy divergentes y no pueden ser relacionados filogenéticamente con los BDs de mamíferos, podrían encontrarse inhibidores selectivos con potencial actividad tripanocida. Como objetivo de este trabajo nos propusimos generar mutantes de TcBDF6 y evaluar su morfología, replicación e infectividad. Para ello, el gen codificante para TcBDF6 fue interrumpido mediante la técnica de CRISPR-Cas9. Luego de varias rondas de selección, se seleccionaron mediante clonado, líneas mutantes heterocigotas (Dm28cBDF6-/+) y homocigotas (Dm28cBDF6-/-), lo que indica que se trata de una proteína no esencial para epimastigotes. Sin embargo, las líneas mutantes mostraron diferencias en cuanto al crecimiento y a la morfología de los epimastigotes, en comparación con los parásitos “wild type”. Ambas líneas produjeron tripomastigotes metacíclicos (TM) in vitro. Cuando se infectaron células Vero con TM Dm28cBDF6-/+, se produjo un atraso en el desarrollo de amastigotes y en la liberación de tripomastigotes, la cual comenzó el día 20 post-infección (en la cepa Dm28c ocurrió a los 7 días). Los tripomastigotes liberados mostraron diferencias morfológicas, pero infectaron células Vero de forma normal, liberando nuevamente tripomastigotes al día 7 post-infección. Por el contrario, los TM Dm28cBDF6-/- fueron completamente incapaces de infectar células Vero. Estos resultados sugieren que TcBDF6 participa, en la infectividad y replicación intracelular del parásito, sugiriendo que podría llegar a ser un interesante blanco terapéutico para el tratamiento de la enfermedad de Chagas.