TcBDF6 REGULA LA REPLICACIÓN E INFECTIVIDAD DE TRYPANOSOMA CRUZI

BOSELLI, VICTORIA; SERRA, ESTEBAN; PERDOMO, VIRGINIA

Congreso; XV Jornadas de Ciencias, Tecnologías e Innovación, UNR; 2021

Universidad Nacional de Rosario

La acetilación de residuos de lisinas en proteínas es una modificación postraduccional dinámica, altamente regulada y reversible, que regula diversas funciones proteicas. El único dominio conocido capaz de reconocer lisinas acetiladas es el bromodominio (BD). En Trypanosoma cruzi (T. cruzi), agente causal de la enfermedad de Chagas, existen 7 proteínas con BD: TcBDF1-7. Sus secuencias son muy divergentes y difíciles de asignar filogenéticamente a un grupo de BDs caracterizado en mamíferos, sugiriendo que podrían encontrarse inhibidores selectivos que pudieran servir como antiparasitarios. Objetivo: evaluar la funcionalidad de TcBDF6 en la morfología, replicación e infectividad de T. cruzi. Metodología: La secuencia genómica de TcBDF6 fue interrumpida mediante la técnica de CRISPR-Cas9 (cepa: Dm28cBDF6-/-). Para evaluar posibles cambios morfológicos entre Dm28cBDF6-/- y Dm28c (cepa control), epimastigotes de ambas cepas se tiñeron con Giemsa y se cuantificaron parámetros morfológicos (ancho y largo) de los parásitos. Para evaluar la replicación de T. cruzi, se realizaron curvas de crecimiento cuantificando diariamente la concentración de epimastigotes de cada cepa, durante 10 días, por triplicado. Se realizaron tinciones con el colorante vital Eritrosina y se cuantificó el % de viabilidad celular. Para evaluar la infectividad, se realizaron al menos 3 rondas de infección de células Vero con tripomastigotes metacíclicos, con una MOI 50:1. Resultados: Mediante CRISPR-Cas9 se obtuvieron mutantes homocigotas Dm28cBDF6-/-, demostrando que TcBDF6 no es esencial para el desarrollo de epimastigotes de T. cruzi. La mutación del gen no produjo cambios significativos en ninguno de los parámetros morfológicos estudiados, sin embargo, observamos una disminución de un 35% en la tasa de crecimiento de los cultivos de la cepa mutante, debido a una disminución en la velocidad de replicación de los epimastigotes, y no a una mayor mortandad. Por último, a diferencia de la cepa control, los tripomastigotes metacíclicos de la cepa mutante fueron incapaces de infectar células Vero. Estos resultados sugieren que TcBDF6 es responsable, al menos en parte, de la regulación de la replicación de epimastigotes y la infectividad de T. cruzi, sugiriendo que podría llegar a ser un interesante blanco terapéutico para el tratamiento de la enfermedad de Chagas.