Combinación de antifúngicos y terapia fotodinámica antimicrobiana sobre biofilms de Candida tropicalis

MARIONI JULIANA; CABRERA JOSÉ L.; NÚÑEZ MONTOYA SUSANA CAROLINA; PARAJE MARÍA GABRIELA

Congreso; XXIII CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGIA y XIV CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGIA, ALAM-CAM 2016. IV CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGIA DE MEDICAMENTOS Y COSMETICOS- CLAMME. REUNION DE LA SOCIEDAD LATINOAMERICANA DE TUBERCULOSIS Y OTRAS MIC; 2016

Candida tropicalis es uno de los patógenos más frecuentemente aislado que causa infecciones fúngicas con capacidad de formación de biofilm. Previamente demostramos que rubiadina (AQ1) y rubiadina éter 1-metil (AQ2), dos antraquinonas fotosensibilizantes aisladas de Heterophyllaea pustulata, presentan acción fotodinámica in vitro sobre biofilms de C. tropicalis. Este efecto está directamente relacionado al estrés oxidativo y nitrosativo. Con el fin de optimizar la acción antifúngica, se estudió la combinación de estas AQs entre sí y de cada una con anfotericina B (ANFB), evaluando el efecto de la irradiación, y la generación de especies reactivas del oxígeno (ERO) y nitrógeno (ERN) como parte del mecanismo de acción. La cuantificación del biofilms se realizó por el método de O´Toole. La combinación de los compuestos se realizó mediante el método del tablero de ajedrez en microdilución. Se trabajó a concentraciones: SubCIM, CIM y SupraCIM. El ensayo se realizó en oscuridad e irradiación con lámpara actínica (15 min). Se determinó adición y sinergismo calculando el Índice de Concentración Inhibitoria Fraccional (FICI). El sobrenadante fue separado para medir la producción de anión superóxido por la reacción de Nitro-Blue tetrazolio (NBT), y la generación de óxido nítrico por Griess. La capacidad antioxidante total del sistema a través del ensayo FRAP (Ferrous Reduction Antioxidant Potency) y la activación de la enzima superóxido dismutasa por el ensayo NBT también fueron estudiados. Ambas AQs sólo poseen actividad antibiofilm cuando son fotosensibilizadas, AQ1 produce un 63.5% de reducción (%R) a la SupraCIM, y AQ2 47 %R a la CIM. ANFB produce un 61.1%R a la CIM. Para las combinaciones de AQs con ANFB en oscuridad se observó indiferencia (FICI > 1). Sin embargo, bajo la acción de la luz, se demostró sinergismo parcial (FICI = 0,75; 65 %R) para la combinación de AQ1 SubCIM y ANFB SubCIM; y adición (FICI = 1, 73 %R) para la combinación AQ2 SubCIM y ANFB SubCIM. Las combinaciones de ambas AQs sólo fueron activas bajo irradiación, alcanzándose sinergismo parcial cuando se combinaron a la SubCIM (FICI = 0,75, 74%R). Todas estas combinaciones produjeron incrementos significativos en los niveles de ERO y ERN, con la consecuente activación de los sistemas antioxidantes (enzimáticos y no enzimáticos). Estos resultados sugieren que ambas AQs fotoactivadas podrían utilizarse hasta en concentraciones SubCIM para potenciar la actividad de ANFB sobre biofilms de C. tropicalis, como así también combinadas entre sí. Por lo tanto, podrían llegar a tener aplicación en la Terapia Fotodinámica Antimicrobiana (TFDA) para el tratamiento de biofilms de C. tropicalis. En conclusión, el desbalance de los sistemas de defensa antioxidante junto con la TFDA, podría ser una nueva estrategia para mejorar la actividad de los agentes antifúngicos con capacidad de generar ROS, convirtiéndose en una alternativa para el desarrollo de tratamientos antifúngicos más eficaces.