Efecto fotodinámico en C. tropicalis de Eosina-Y libre y asociada a un policatión derivado de timina: cuando la supramolecularidad es una ilusión

MARCELO SOSA; JULIANA MARIONI; SUSANA NUÑEZ MONTOYA; CLAUDIO D. BORSARELLI

San Carlos de Bariloche

Otro; IV Reunión de fotobiólogos moleculares argentinos; 2018

El desarrollo de dispositivos supramoleculares que produzcan efecto fotodinámico (EFD) en medios aeróbicos a partir de la generación fotosensibilizada de especies reactivas de oxígeno (ERO) es una temática de creciente interés actual tanto para la desinfección de aguas y superficies, como para el tratamiento de enfermedades infecciosas.1 En este trabajo comparamos la eficiencia de EFD sobre la forma planctónica de levaduras de Candida tropicalis NCPF 3111 en PBS de una molécula fotosensibilizadora clásica como la eosina amarilla (EY), un colorante xanténico dianiónico con rendimiento cuántico de generación de oxígeno singulete de 0.57, ya sea en forma libre o asociada a un policatión compuesto de copolímeros de vinilbencil timina (VBT) y vinilbencil trietilamonio (VBA) de formula general POL = {[(VBT)(VBA)4]4+}=25. La formación del aducto EY-POL fue estudiada por espectroscopía de absorción y emisión, tanto de régimen estacionario y dinámico. Se observó una asociación eficiente del colorante al policatión como producto de interacciones electrostáticas e hidrofóbicas, formando un aducto 1:1 a relaciones de concentración molar [POL]/[EY] > 2 y con rendimiento cuántico = 0.50. Este aducto fue fotoestable a diferencia del colorante libre en buffer. Se incubaron en oscuridad soluciones 9 uM de EY libre y del aducto EY-POL ([POL]/[EY] = 5) en suspensiones de levaduras planctónicas de C. tropicalis a 37 oC, y se comprobó su localización por la fluorescencia verde de EY mediante microscopía de fluorescencia invertida. EY libre pudo penetrar la levadura distribuyéndose en todo el interior celular, mientras que el aducto EY-POL se adsorbió en la membrana celular. No se observó inactivación en estas condiciones. Luego los extractos fueron irradiados con un LED blanco de 100 W hasta 30 min y se tomaron alícuotas a diferentes tiempos de irradiación para el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC).2 Para los extractos con EY libre se observó EFD (con 6 log de mortandad), los cuales también presentaron efecto de fotoblanqueo. Contrariamente, los extractos con EY-POL no mostraron EFD ni fotoblanqueo. Por lo tanto, estos resultados demuestran que si bien la formación de una estructura supramolecular EY-POL mejora la fotoestabilidad del colorante tanto en ensayos fisicoquímicos como biológicos, el efecto EFD queda completamente supeditado a la incorporación del sensibilizador en la levadura.