ESTUDIO DE LAS PROTEINAS ADAPTADORAS AP-2 EN EVENTOS DE EXCITOTOXICIDAD

TRONCOSO M.; ASENSIO, J.; SELTZER, AM.; SOSA, MA.

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2015

SAIC - SAFE - SAFIS

La endocitosis mediada por vesículas cubiertas con clatrina es un proceso crucial para el mantenimiento de la integridad neuronal. La cubierta de las vesículas tiene proteínas adaptadoras. AP2 es un heterotetrámero formado por subunidades α, β2, μ2 y 2. En el tejido nervioso se han descrito dos isotipos de α, α1 y α1, y su co-existencia aún no ha sido explicada. Objetivos: Estudiar el comportamiento de ambas subunidades α en neuronas, en modelos animales o en líneas celulares, sometidos a diferentes condiciones de excitotoxicidad. Metodología: Cultivos de líneas celulares: neuronas estriatales; StHdhQ7 (normales) y StHdhQ111 (con extensión poliglutamina típica de la enfermedad de Huntington), fueron tratadas con 250 uM de ácido quinolínico (AQ) durante 3 o 6 hs. Las células fueron procesadas para estudios de IFI, o de inmunoblot, utilizando un anticuerpo anti-AP2. Animales: se realizó una lesión por hipoxia-isquemia (H/I) a ratas (Wistar ? Kyoto) de 7 días de edad. El tejido cerebral se extrajo a los 5 días post-lesión. Para evaluar la presencia de proteínas ?docking? para AP-2 en membranas de cerebro de ratas o de las células, se realizaron ensayos ?binding? con AP-2 obtenidas de cerebro bovino. Resultados: En células se observaron (por IFI y WB) diferencias en la expresión de AP-2 entre ambas líneas celulares, siendo menor en las Q111, pero con una distribución perinuclear que co-localiza con golgina. El tratamiento con AQ indujo cambios en ambas líneas celulares; con una redistribución dispersa, pérdida de co-localización con golgina y un aparente aumento de la expresión en las Q111. En animales se observó un aumento de AP-2 en la corteza de H/I del lado contralateral, y una tendencia similar en hipocampo. En los ensayos ?binding? se observó que la subunidad α1 tiene afinidad por membranas, la cual es menor en la corteza de animales H/I. Concluimos que la maquinaria endocítica podría ser alterada por la excitotoxicidad.