Efecto de la acetosiringona y el tiempo de co-cultivo sobre la eficiencia de transformación de Lotus tenuis mediada por Agrobacterium tumefaciens

GUTIERREZ, F.G; AFFINITO, A; ROLDAN, M.L; MACIEL, M.A; DIAZ PALEO, A

Pergamino

Congreso; II Congreso Multidisciplinario UNNOBA; 2022

Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires (UNNOBA)

Lotus tenuis es una importante forrajera en suelos con limitantes edafoclimáticas. Para favorecer la cría de ganado en estos suelos es necesario disponer de cultivares de alta productividad con tolerancia incrementada a estreses abióticos, lo cual se puede lograr utilizando herramientas biotecnológicas como la transformación genética mediada por Agrobacterium tumefaciens. Existen diversos factores que son claves en la transferencia e integración del ADN-T de A. tumefaciens en el genoma de la planta transformada. Entre ellos, el tiempo de co-cultivo entre el explante y la bacteria y la adición de acetosiringona, compuesto fenólico que induce la transferencia. El objetivo de este trabajo fue optimizar la técnica de transformación de L. tenuis mediante A. tumefaciens. Para esto, se realizaron modificaciones a un protocolo publicado a fin de incrementar su eficiencia. Se utilizó la cepa GV3101 portadora del plásmido pCambia2301 que permite la expresión constitutiva del gen reportero gusA-intrón, que codifica para la enzima ß-glucoronidasa, que cliva el colorante X-Gluc y da un precipitado de color azul índigo. Se utilizaron dos tiempos de co-cultivo (20 y 40 min) y dos concentraciones de acetosiringona (0 y 100 M). Se determinó la existencia de asociación entre la adición de acetosiringona al cultivo y la presencia de tinción azul en los explantes, dada por la expresión del gen gusA (Chi cuadrado, p=0,003). También se encontró una tendencia a una mayor transferencia de ADN cuando se realizó un co-cultivo más largo (p=0,1). En conclusión, las modificaciones aplicadas permitieron incrementar la eficiencia de transformación en un 11 % y se prevé continuar con la optimización del protocolo comparando diferentes cepas de A. tumefaciens