OPTIMIZACIÓN DE TÉCNICAS DE REGENERACIÓN IN VITRO Y TRANSFORMACIÓN GENÉTICA MEDIADA POR Agrobacterium tumefaciens EN Lotus tenuis (Wald et. Kit)

GUTIERREZ, F.G; AFFINITO, A; ROLDAN, M.L ; MACIEL, M.A; DIAZ PALEO, A

corrientes capital

Congreso; L Congreso Argentino de Genética; 2022

Sociedad Argentina de Genética

Lotus tenuis (Wald et. Kit) es una importante forrajera en suelos con limitantes edafoclimáticas. Para favorecer la cría de ganado en estos suelos es necesario disponer de cultivares de alta productividad con tolerancia incrementada a estreses abióticos, lo cual puede lograrse con el apoyo de herramientas biotecnológicas. El objetivo de este trabajo fue optimizar técnicas de regeneración in vitro y transformación mediante Agrobacterium tumefaciens en L. tenuis. Para esto se evaluó el porcentaje de regeneración de folíolos de 4 genotipos de diversos orígenes a los 19, 30, 35, 45 y 60 días en un diseño experimental completamente aleatorizado con 6 repeticiones. Se realizó ANOVA de 2 factores. El genotipo PampaWT presentó mayor regeneración hasta los 35 días. Se repitió el ensayo con PampaWT comparando lugar de cultivo: invernáculo, sala de crecimiento e in vitro. Los explantes (folíolos) provenientes de plantas in vitro presentaron mayor regeneración. Posteriormente, se realizó transformación mediante A. tumefaciens cepa GV3101 portador del plásmido pCambia2301 que permite la expresión constitutiva del gen reportero gusA-intrón. Se comparó la transferencia de ADN mediante la adición o no del compuesto fenólico acetosiringona. Existió asociación (Chi cuadrado, p=0,003) entre el co-cultivo con acetosiringona y la presencia de tinción azul en los explantes, dada por la expresión del gen gusA. En conclusión, la regeneración in vitro de la especie dependió del genotipo y su lugar de cultivo, y la adición de acetosiringona incrementó la eficiencia de transformación genética.