Estudios de la interacción de la ciclofilina TcCyP19 del Trypanosoma cruzi, con células de mamífero

PERRONE, A; CAMARA, MM; GONZALEZ, MN; BUSTOS, PL; GARCIA, GA; FUCHS, AG; BUA, J

Buenos Aires

Congreso; XXV Reunion de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2012

Estudios de la interacción de la ciclofilina TcCyP19 del Trypanosoma cruzi, con células de mamífero. Alina E. Perrone, María de los Milagros Cámara, Mariela N. González, Patricia L. Bustos, Gabriela A. García, Alicia G. Fuchs y Jacqueline Bua. Instituto Nacional de Parasitología “Dr. Mario Fatala Chabén, ANLIS Malbrán. CAECIHS, Universidad Abierta Interamericana. Las ciclofilinas son proteínas chaperonas que intervienen en el plegado de péptidos que poseen prolina. En el T. cruzi hemos descripto la familia de ciclofilinas, y entre ellas, una isoforma citosólica de 19 kDa, la TcCyP19, homóloga a la CyPA de mamíferos. En estudios previos probamos que esa ciclofilina posee actividad enzimática y puede secretarse al medio de cultivo. Con el objetivo de conocer su función en relación a su interacción con la células de mamífero se transfectaron epimastigotes de la cepa Y con con la construcción pTEX - TcCyP19 - eGFP. Los parásitos transfectantes, que sobre-expresan la proteína TcCyP19 no mostraron diferencias en la morfología ni en su tiempo de duplicación, respecto de los parásitos de tipo salvaje. Se observó que los parásitos transfectantes son fluorescentes en todo su citoplasma, confirmando su localización citosólica intracelular. Los sobrenadantes de epimastigotes transfectantes revelan por espectrofluorometría la secreción de la proteína TcCyP19 fluorescente. Se obtuvieron tripomastigotes transfectantes que sobre-expresan TcCyP19. Los sobrenadantes de estos parásitos, con la TcCyP19-GFP secretada, así como la TcCyP19 recombinante marcada con fluoresceína se adhieren a las monocapas de células VERO. Por otra parte, los experimentos de infección de células, comparando los tripomastigotes transfectantes respecto de los tripomastigotes de tipo salvaje, no mostraron diferencias significativas en la infectividad en células de mamíferos. Nuestros resultados indican que la TcCyP19 del T. cruzi se secreta e interactúa con la célula del mamífero y los tripomastigotes que sobre-expresan esta proteína serán una herramienta fundamental para dilucidar el rol que cumple esta proteína en el huésped mamífero. Este trabajo contó con la financiación del ANLIS Malbrán, Fogarty D43TW007888, Focanlis 2010 y CAECIHS, UAI.