Identificación y caracterización en Trypanosoma cruzi de proteínas homólogas a la glutatión-S-transferasa de 26 Kda de Schistosoma japonicum

GARCIA, GA; ESTEVA, MI; BONTEMPI, EJ; BUA, J; RUIZ, AM

Sierra de la Ventana, Buenos Aires, Argentina

Congreso; V Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 1997

Sociedad Argentina de Protozoologia

Las glutatión-S-transferasas (GSTs) son un grupo de enzimas involucradas en la detoxificación que catalizan la conjugación del glutatión reducido con compuestos electrofílicos nocivos para la célula. Las GSTs deSchistosoma son un blanco potencial para inmuno y quimioterapia  contra la enfermedad que dichos parásitos provocan. Si bien se detectó actividad para dicha enzima en Trypanosoma cruzi, aún no se caracterizó totalmente alguna glutatión o trypanotión-S-transferasa. El objetivo de este trabajo es la identificación de enzimas homólogas a la GST de 26 Kda de Schistosoma japonicum (GSTsj) expresada por el plásmido pGEX1 en T. cruzi, ya que se observó reactividad de un antisuero contra esta proteína sobre antígenos de este parásito. A partir de la fracción citosólica de epimastigotes de la cepa Tulahuén (stock Tul 2) se purificó por inmunoafinidad, utilizando anticuerpos purificados del mencionado antisuero, un grupo de proteínas homólogas a la GSTsj (PHGSTsj). En electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS la fracción PHGSTsj mostró tener al menos diez proteínas con un peso molecular entre 10 y 56 Kda. Una de ellas de 11.7 Kda fue seleccionada para realizar la secuencia N-terminal y se observó que los primeros quince aminoácidos mostraron homología con enzimas de óxido reducción de distintos organismos, entre ellas algunas pertenecientes a la familia de las flavoenzimas transhidrogenasas, indicando la posible presencia de una enzima que participe del metabolismo del glutatión en T.cruzi , ya que tanto la glutatión reductasa de mamíferos como la trypanotión reductasa de Trypanosomatidos  pertenecen a esta familia. Se realizó un rastreo inmunológico en una genoteca de T. cruzi que permitió identificar varios clones. Algunos mostraron tener insertos de 4500 pb y actualmente se está procediendo a la secuenciación de los mismos a fin de caracterizar genéticamente a estas proteínas que podrían constituirse en posibles blancos de ataque para la destrucción del parásito.