Caracterización molecular de un clon de ADN de Trypanosoma cruzi reconocido por un suero anti-glutatión-S-transferasa de Schistosoma japonicum

GARCIA, GA; BUA, J; BONTEMPI, EJ; ESTEVA, MI; RUIZ, AM

Buenos Aires, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Microbiología; 1998

Sociedad Argentina de Microbiología

Las glutatión-S-transferasas (GSTs) son un grupo de enzimas muy conservadas estructuralmente e involucradas en la detoxificación. Las GSTs de Schistosoma  y Fasciola  son un blanco potencial para inmuno y quimioterapia  contra la enfermedad que dichos parásitos provocan. En el Trypanosoma cruzi  se detectó actividad para dicha enzima y aunque hace varios años ya fue publicada su purificación , hasta el momento no se conoce su secuencia aminoacídica ni nucleotídica. Un suero contra la GST de 26 Kda de Schistosoma japonicum  expresada por el plásmido recombinante pGex fue capaz de reconocer antígenos en el T. cruzi  por técnicas de enzimoinmunoensayo y "western blot", por lo tanto se considera que la identificación y caracterización de estos antígenos de reactividad cruzada resultaría interesante a fin de determinar si los mismos están relacionados con el metabolismo del glutatión, el cual es un punto de gran divergencia entre el T. cruzi  y su hospedero mamífero. Con este objetivo se realizaó un rastreo con el suero anti-GST de Schistosoma japonicum  en una genoteca de T. cruzi construida en el vector lZAPII. Se identificaron 38 clones positivos, los cuales se denominaron PHGSTs. Los seis que se seleccionaron en primera instancia presentaron un inserto de 5.5 Kb y tres de ellos demostraron una secuencia idéntica de 200 bases a partir de su extremo 5'; por lo cual se selecciónó sólo uno de ellos para su posterior caracterización, el clon PHGST # 5. El inserto de este clon híbridó en experimentos de "southern blot" con el fragmento de pGex cortado con BamH1 y HincII que contiene a la GST y con ADN de T. cruzi  pero no con ADN de Leishmania braziliensis. Por hibridación del inserto con los cromosomas de T. cruzi separados por electroforesis en campo pulsado (PFGE) y en una biblioteca genómica del parásito construida en cósmidos y grillada en filtros de alta densidad se determinó que dicha secuencia se encuentra en el cromosoma # 3 del parásito cuyo tamaño es de 610 Kpb y en su homólogo de 1020 Kpb. La secuencia  realizada a partir del extremo 3' presentó homología con secuencias repetitivas SIRE (Short Interspersed Repetitive Element). Hasta el momento se secuenciaron 1040 bases a partir del extremo 5', que demostraron tener una  homología mayor al 60 % con proteínas pertenecientes a la superfamilia  de antígenos de superficie de trypomastigotes. Si bien algunos miembros de esta superfamilia poseen una actividad enzimática conocida (por ej. transialidasa), quedaría por elucidar si la misma puede incluir enzimas pertenecientes al ciclo del glutatión, como lo es la GST. La identificación de nuevas enzimas de este ciclo permitiría profundizar en el conocimiento de una vía metabólica muy importante para la supervivencia del T. cruzi. Por otro lado la caracterización de estos antígenos de reactividad cruzada podría llevarse a cabo desde el punto de vista inmunogénico teniendo en cuenta los antecedentes existentes en otros parásitos.