Identificación, caracterización y modelado molecular de una nueva glutaredoxina del Trypanosoma cruzi

GARCIA, GA; BUA, J; ASLUND, L; PAULINO, M; BONTEMPI, EJ; RUIZ, AM

Huerta Grande, Cordoba, Argentina

Congreso; VI Congreso de Protozoología y enfermedades parasitarias; 2000

Sociedad Argentina de Protozoologia

El descubrimiento de nuevas moléculas del Trypanosoma cruzi que participen en el ciclo del glutatión y la tripanotiona, un punto de divergencia entre el metabolismo del hospedero mamífero y el parásito, podrán definir nuevos blancos terapéuticos para esta enfermedad. Con este objetivo se seleccionó el ADNc 19h22 generado a partir del Proyecto Genoma de T. cruzi, por poseer su mayor homología con una probable glutatión-S-transferasa (GST) de Caenorhabditis elegans,  una enzima involucrada en esta vía y aún no clonada en el T. cruzi. La secuencia genómica obtenida por hibridización de una genoteca de T. cruzi construida en cósmidos con el clon 19h22, mostró un marco abierto de lectura de 936 pb codificando para una proteína de 312 aminoácidos con un peso molecular estimado de 35.17 kDa. Dicha proteína presentó homología con glutaredoxinas (Grxs) y GSTs de diferentes organismos, no encotrándose contraparte en los mamíferos. Dado que contiene el patrón completo de Grx con un sitio activo CPFC esta proteína fue denominada TcGRX. Experimentos de “southern” y “dot blot” sugirieron que este gen se encuentra en copia única. El clon 19h22 hibridizó dos cromosomas posiblemente homólogos de 680 y 775 Kpb en electroforesis en campo pulsado (Pulsed Field Gel Electrophoresis). Se realizó el modelado molecular de una porción de la TcGRX utilizando la Grx3 de E. coli como templado, demostrándose una estructura terciaria típica de la familia tioredoxina/glutaredoxina. De acuerdo con la secuencia y el modelo estructural obtenido, la TcGRX podría estar implicada en el metabolismo del glutatión/tripanotiona en el T. cruzi. La expresión de la misma y su caracterización bioquímica definirán en qué vía metabólica está involucrada y nos dará información para ser seleccionada como blanco para el desarrollo de drogas tripanocidas.