Caracterizacion de una probable enzima del metabolismo del tiol de Trypanosoma cruzi

GARCIA,GA; GARAVAGLIA, PA; PAULINO, M; MINNING, T; AINCIART, N; POTENZA, M; RUIZ, AM

La Paz, Bolivia

Congreso; XVI Congreso Latinoamericano de Parasitologia; 2003

Federación Latinoamericana de Parasitología

Objetivo: Caracterización de una nueva proteína de T. cruzi, TcGrx, homóloga con componentes del ciclo del glutatión (GSH), un metabolismo divergente entre el parásito y el mamífero. Materiales y métodos: El gen TcGrx se clonó en varios vectores de expresión. Sólo en pET-43 se obtuvo NUS-TcGrx soluble que se purificó por IMAC y se utilizó en ensayos bioquímicos. La TcGrx nativa se identificó por "western blot" con un suero anti-TcGrx . La detección del ARNm se realizó por RT-PCR utilizando un oligo reverso y miniexon. Resultados y discusión: El gen TcGrx se seleccionó de la base de datos de ESTs de T. cruzi por codificar para una proteína homóloga con glutarredoxinas (Grxs) y glutatión-S-transferasas (GSTs) y no poseer contraparte en mamíferos. Este gen es de copia única y tanto su ARNm como la proteína se encontró en diferentes estadíos del parásito. La proteína recombinante NUS-TcGrx no presentó actividad de tiol-transferasa, ni GST. Sin embargo, no puede descartarse que la TcGrx utilice sustratos no tradicionales y/o tripanotiona (TSH), un tiol presente en tripanosomátidos, en lugar de GSH. El modelado molecular de la TcGrx sobre la Grx2 de E. coli, sugiere que posee la estructura típica de Grxs en su porción N-terminal. La importancia del descubrimiento de nuevas moléculas que participen en el ciclo del GSH/TSH reside en la definición de nuevos blancos para el diseño de drogas tripanocidas.