Identificación, caracterización y purificación de una probable reductasa NADPH dependiente que contiene grupos tioles de Trypanosoma cruzi

GARCIA, GA; GARAVAGLIA, PA; ESTEVA, MI; DUSCHAK, VG; RUIZ, AM

Rosario, Prov. Sta. Fe, Argentina

Congreso; XX Reunión de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2004

Sociedad Argentina de Protozoologia

El protozoario Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, posee un ciclo del glutatión (GSH) particular, ya que sintetiza un análogo de este compuesto denominado tripanotiona. Con el objeto de caracterizar nuevas enzimas de este metabolismo, se clonó una nueva proteína del parásito, denominada TcGrx, que posee el patrón de glutarredoxinas (Grxs) CXXC y presenta similitud con prostaglandina (PG) E sintasas-2 y glutatión-S-transferasas (GSTs). Un suero anti-TcGrx recombinante reconoció dos proteínas en lisados de epimastigotes, una con el peso molecular esperado de 35 kDa y otra de 32 kDa, denominadas TcGrx35 y TcGrx32, respectivamente. En citosol de epimastigotes se encontró sólo TcGrx32, mientras que en lisados de los estadios presentes en el hospedero mamífero, tripomastigote y amastigote, sólo se observó TcGrx35. A fin de definir algún posible sustrato de la TcGrx32 se determinó su capacidad de unir determinadas sustancias mediante cromatografía de afinidad. La TcGrx32 se unió a tiopropil-agarosa, confirmado que posee tioles en su secuencia que probablemente correspondan al patrón de Grx CXXC presente en la TcGrx recombinante. No presentó afinidad por GSH-agarosa ni por S-hexylGSH-agarosa, que si bien no descarta al GSH como sustrato, sugeriría que utiliza otro tiol. Mostró capacidad de unión a cibacron blue-agarosa y se eluyó específicamente con NADPH 0.7 mM casi a homogeneidad, sugiriendo que es una reductasa NADPH dependiente. La caracterización bioquímica de la TcGrx32 determinará si está involucrada en el metabolismo del GSH y eventualmente en el de PG. Por otro lado, su secuenciación determinará si TcGrx35 y TcGrx32 corresponden a dos isoformas de la misma proteína o son dos proteínas diferentes que presentan reacción cruzada con el suero anti-TcGrx.