Caracterización bioquímica de una aldo-ceto reductasa de Trypanosoma cruzi con actividad de quinona oxido reductasa (QOR)

GARAVAGLIA, PA; GARCIA, GA; CANNATA, JB

Rosario, Sta. Fe, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2008

Sociedad Argentina de Protozoologia

Las oxidoreductasas son enzimas cruciales en el metabolismo de drogas tripanocidas. Existen evidencias de que su reducción genera especies reactivas del oxígeno sumamente tóxicas para Trypanosoma cruzi, el agente etiológico de la Enfermedad de Chagas. En nuestro laboratorio se identificó una nueva enzima perteneciente a la familia de las aldo-ceto reductasas (AKRs), denominada TcAKR. La TcAKR recombinante (recTcAKR) presenta actividad de AKR, con afinidad sólo por NADPH como cofactor, con los sustratos comunes para esta superfamilia, 4-NBA y 2-DHA. Dado que algunas AKRs poseen actividad de QOR y que algunas quinonas presentan efecto tripanocida in vitro, se estudió la actividad de QOR de la recTcAKR. Las drogas estudiadas pertenecen a dos grupos: las o-naftoquinonas (1,2-naftoquinona (1,2NQ), 9,10-fenantrenquinona (9,10PQ) y b-lapachona) y las p-naftoquinonas (5-hidroxi-1,4-naftoquinona, 2-hidroxi-1,4-naftoquinona, a-lapachona y menadiona). La recTcAKR mostró actividad de QOR sólo por las o-naftoquinonas, en especial por 1,2NQ y 9,10PQ con un Km de 9,6 uM y 13 uM, respectivamente. Mediante la técnica del citocromo C acetilado se comprobó que la reacción ocurre mediante la reducción del tipo "un electrón" de la quinona con formación del radical semiquinona. Por otro lado, utilizando columnas de exclusión molecular, se pudo determinar la co-existencia en la preparación de recTcAKR de tres formas oligoméricas: monómero, dímero y tetrámero. Estos resultados sugieren que la TcAKR sería al menos una de las oxidoreductasas parasitarias responsables del efecto tripanocida de las quinonas.