PROBABLE PARTICIPACION DE UNA ALDO-CETO REDUCTASA DE TRYPANOSOMA CRUZI (TcAKR) EN EL MECANISMO DE ACCION DE

GARAVAGLIA, PA; CANNATA, JB; GALLEANO, M; GARCIA, GA

Santa Fe, Prov. Sta. Fe, Argentina

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2009

Sociedad Argentina de Protozoologia

Trypanosoma cruzi, el agente etiológico de la Enfermedad de Chagas, posee una limitada capacidad para eliminar especies reactivas del oxígeno. Estos radicales libres pueden formarse por varios mecanismos incluyendo el metabolismo de drogas. Se postula que ciertas drogas tripanocidas como nitroheterociclos y naftoquinonas, entre ellas la b-lapachona, son reducidas por reductasas del parásito formando radicales aniones de la droga, que bajo condiciones aeróbicas derivan en la formación de metabolitos tóxicos del oxígeno. Recientemente, hemos identificado y caracterizado una reductasa NADPH-dependiente citosólica perteneciente a la superfamilia de las aldo-ceto reductasas (AKRs), denominada TcAKR. La enzima recombinante (recTcAKR) presenta, además de actividad de AKR con los sustratos comunes para esta superfamilia, 4-NBA y 2-DHA, actividad de quinona-óxido reductasa (QOR) con afinidad solo por las o-naftoquinonas, en especial por 1,2-naftoquinona (1,2NQ), 9,10-fenantrenquinona (9,10PQ) y b-lapachona. A partir de la reducción de 9,10PQ y 1,2NQ utilizando la recTcAKR, en presencia de citocromo C acetilado, se comprobó la formación de anión superóxido (0.211 y 20.71 mmoles de superóxido/min/ml de enzima, respectivamente) en una relación 2:1 con el consumo de NADPH. Alternativamente, a partir de la reducción de 9,10PQ y b-lapachona por la recTcAKR, en presencia del atrapante DMPO se identificaron espectros de resonancia de electro spin (EPR), compatibles con el aducto radical hidroxilo-DMPO, confirmando la generación de radicales libres. Por otro lado, se evaluó el efecto in vivo de dichas o-naftoquinonas sobre epimastigotes de T. cruzi, pudiendo determinar que 9,10PQ posee una toxicidad similar a la b-lapachona con un valor de IC50 de 5.75 µM, mientras que para 1,2NQ se determinó un IC50 de 62 mM, muy alejado de las concentraciones fisiológicas. Nuestros resultados sugieren que el efecto parasiticida de la 9,10PQ y la b-lapachona estaría dado por la reducción de dichas drogas por la TcAKR con la concomitante producción de radicales libres en el citosol del parásito. A fin de confirmar esta hipótesis, en futuros estudios se evaluara la susceptibilidad a dichas drogas de epimastigotes transfectados que sobreexpresan dicha enzima.