Posible rol de la aldo-ceto reductasa de Trypanosoma cruzi (TcAKR) en el efecto tripanocida de las o-naftoquinonas

GARAVAGLIA, PA; LAVERRIERE, M; CANNATA, JB; GARCIA, GA

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso de Protozoología y Enfermedades Parasitarias.; 2011

Soc. Argentina de Protozoologia

Posible rol de la aldo-ceto reductasa de Trypanosoma cruzi (TcAKR) en el efecto tripanocida de las o-naftoquinonas Garavaglia P1, Laverrière M2, Cannata J2,3 y García G1. 1Instituto Nacional de Parasitología “Dr. Mario Fatala Chaben”. 2IIB-INTECH, UNSAM-CONICET. 3CEFYBO Facultad de Medicina-UBA. e-mail: pato_garavaglia@hotmail.com Varios trabajos indican que el efecto tripanocida de las o-naftoquinonas (o-NQs), entre ellas la β–lapachona, está mediado por radicales libres del oxígeno generados cuando estos compuestos son utilizados por enzimas del parásito. Recientemente, identificamos por primera vez una aldo-ceto reductasa de Trypanosoma cruzi (TcAKR), que posee, además, actividad de quinona óxidoreductasa (QOR) especifica solo para las o-NQs como β–lapachona, 9,10-fenantrenquinona (9,10-PQ) y 1,2-naftoquinona (1,2-NQ), con formación concomitante de anión superóxido y radical hidroxilo (Garavaglia y col., 2010, Mol Biochem Parasitol 173:132). Con el objeto de determinar si la TcAKR está involucrada en el mecanismo de acción de las -NQs se evaluó el efecto de estas drogas en parásitos que sobreexpresan la TcAKR. Para ello, el gen TcAKR se clonó en el plásmido inducible por tetraciclina pTcIndex, y dicha construcción se utilizó para transfectar epimastigotes de T. cruzi. La sobreexpresión de la TcAKR se detectó mediante “western blot” con un suero anti-TcAKR y por medición de actividad enzimática al inducir con 5 µg/ml de tetraciclina por 72 hs. La actividad específica de AKR utilizando 4-NBA como sustrato aumentó en los parásitos inducidos de 0.11 a 0.41 nmoles de NADPH/min/µg; mientras que la actividad de QOR utilizando 9,10-PQ como sustrato incrementó de 0.053 a 0.11 nmoles de NADPH/min/µg. La evaluación del efecto tripanocida sobre los parásitos transfectados no inducidos mostró que la IC50 de la 9,10-PQ (2.1 µM) fue del mismo orden a las obtenidas con las drogas de probada actividad tripanocida: -lapachona (7.9 µM), Benznidazol (9.4 µM) y Nifurtimox (3 µM); mientras que la 1,2-NQ mostró un IC50 de 97.6 µM del mismo orden al obtenido con α-lapachona (77.6 µM). Al realizar los ensayos de toxicidad sobre los parásitos transfectados inducidos con tetraciclina sólo se observó una disminución significativa en el valor de IC50 con la -lapachona, obteniéndose una variación de 7.9 µM a 5.1 µM para esta droga en los parásitos que sobreexpresaron la TcAKR. Los ensayos de toxicidad se realizaron en placas de 96 pocillos por duplicado, en al menos tres experimentos independientes. Se puede concluir que la TcAKR podría estar involucrada en el mecanismo de acción de la β-lapachona, ya que los parásitos que sobreexpresan esta enzima muestran mayor susceptibilidad al tratamiento con dicha droga. En relación a la 9,10-PQ, si bien mostró un efecto tripanocida superior al de la -lapachona, nuestros resultados sugieren que el mismo no estaría relacionado con la acción de la TcAKR.