Caracterización de la actividad FMN ciclasa de la enzima dihidroxiacetona quinasa de Trypanosoma cruzi, TcDAK

GARAVAGLIA, PA; SOPRANO, LL; TASSO, LAURA MÓNICA; DUSCHAK, VG; CANNATA, JB; GARCIA, GA

La Plata

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2023

Sociedad Argentina de Protozoologia

Las dihidroxiacetona (DHA) quinasas (DAKs) son una familia de enzimas muy conservadas en secuencia que convierten a la DHA en el intermediario glicolítico DHA-fosfato. Por otro lado, algunas DAKs, además de esta actividad, poseen actividad FMN ciclasa. Hasta el momento, la única DAK descripta en tripanosomátidos es la de Trypanosoma cruzi, el agente etiológico del Chagas, denominada TcDAK. Esta enzima posee actividad DAK dependiente de ATP y recientemente, fue caracterizada por nuestro grupo de trabajo. Actualmente, nos propusimos estudiar la actividad FMN ciclasa de la TcDAK recombinante. La actividad FMN ciclasa consiste en el clivaje de la flavina adenina dinucleótido (FAD) a riboflavina 4´,5´-fosfato (FMN cíclico) y adenosina mono-fosfato (AMP). La conversión de FAD a FMN cíclico se evaluó por espectrofotometría, midiendo la hipercromicidad del FAD clivado, a 265 nm. En presencia del catión divalente Mn+2, se determinó un pH óptimo de 8, con los siguientes parámetros cinéticos para FAD: Km 9.62 µM, Vmáx 127 nmoles/min/mg y Kcat 259.6 min-1. Teniendo en cuenta que los sustratos ATP y FAD pueden actuar mutuamente como inhibidores competitivos, se estudió el efecto inhibitorio del ATP sobre la actividad FMN ciclasa, obteniendo un IC50 de 56.1 nM. La actividad dual de la TcDAK así como el desconocimiento de la función del FMN cíclico hacen de esta enzima un blanco interesante de estudio. Las DAKs juegan un rol central en laadaptación al stress hiperosmótico en varios microorganismos. En T. cruzi, la hiperosmolaridad y las flavinas son factores que favorecen la metaciclogénesis, es decir, la diferenciación de epimastigote a tripomastigote metacíclico en el intestino del insecto vector. Estos antecedentes nos permiten postular que la TcDAK podría participar en este proceso de diferenciación parasitaria.