Prototipo de ELISA sándwich basado en nanoanticuerpos para la detección de antígeno del Virus de la Hepatitis E de transmisión zoonótica

ARCE, L.P.; MATIAS BRANCHER, J.; PAVAN, M. F.; BOK, M.; PARREÑO, V.; VIZOSO PINTO, M.G.*; IBAÑEZ, L.I.*

Jornada; AAIV 2022 - XIV Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria II - Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria; 2022

SOMEVE

El Virus de la Hepatitis E (HEV) es un virus zoonóticoemergente causante de hepatitis aguda. La detección delantígeno de cápside (ORF2 glicosilada) que circula libre enplasma o de la partícula viral en heces permite diagnosticarla infección. Recientemente, obtuvimos nanoanticuerpos(VHHs) contra ORF2. Nuestro objetivo fue desarrollarun prototipo de inmunoensayo basado en VHHs para ladetección de antígeno. ORF2 HEV-3 fue expresada encélulas HEK 293 y purificada mediante cromatografía deafinidad. Se seleccionaron 6 VHHs anti-ORF2 según laregión determinante de hipercomplementariedad (CDR3)y se realizó la expresión, purificación y modificación condiferentes etiquetas (unión a plástico (VHHPSW) y unión abiotina (VHHbio)). La afinidad de los VHHs sin modificar seevaluó mediante ELISA indirecto, brevemente se sensibilizócon diferentes concentraciones de ORF2 (o.n. 4°C), bloqueocon leche 5 %, luego se añadió diferentes concentracionesde VHHs y finalmente se incubó con anti-HisHRP. Los VHHscon y sin modificaciones que presentaron mayor afinidad porla proteína, se usaron para un prototipo de ELISA sándwichpara la detección de antígeno. Se probaron: tipo de placa yconcentraciones variables de los siguientes reactivos: VHH,VHHPSW, agente bloqueante, ORF2 glicosilada, VHHbio yanticuerpo estreptavidina HRP. Los VHHs que presentaronmayor afinidad fueron los VHH11 y VHH18. Las condicionespreliminares para el ELISA sándwich fueron: concentracióndel VHHPSW 0,1 ig/ml, gelatina 1 %, VHHbio 1/200 yestreptavidina conjugada 1/10000. El límite de detecciónfue 100 ng/ml de ORF2 glicosilada. Desarrollamos unprototipo para detección de antígeno de HEV que luegode ser validado podrá ser usado en muestras de suero yheces para el diagnóstico y pronóstico de la infección porHEV. Esta herramienta es de utilidad para el control de latransmisión zoonótica del HEV-3.