TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE CEBOLLA MEDIADA POR AGROBACTERIUM TUMEFACIENS

MARINANGELI, PABLO; DELUCHI, BERNARDO; RÍOS, RAÚL; FRANZONE, PASCUAL; CURVETTO, NÉSTOR

Mendoza

Congreso; XXIII congreso Argentino de Horticultura; 2000

ASAHO

Informamos la optimización de algunos parámetros que afectan la expresión transitoria del gen reportero uidA luego de la transformación de inflorescencias inmaduras, embriones cigóticos maduros y callos de varios genotipos del género Allium con Agrobacterium tumefaciens; obteniendo así un protocolo sencillo para transformar embriones cigóticos de cebolla de la variedad de mayor cultivo nacional, Valcatorce INTA. En transformación de inflorescencias inmaduras comprobamos que no fue necesaria la presencia de acetosiringona en el medio de cultivo de las bacterias y que la mejor cepa de Agrobacterium tumefaciens fue Agl1, aunque se observó sobrecrecimiento en co-cultivo si su concentración inicial superaba una DO600 de 0,7 o si se co-cultivaba por más de tres días. Para inocular los explantos fueron suficientes entre cinco y 20 minutos, siendo deletéreo un tiempo mayor. Para lograr buena expresión transitoria los embriones cigóticos deben cultivarse siete días en medio de inducción de callos antes de la transformación y requieren una agitación con microesferas de vidrio durante la inoculación. Su uso resulta ventajoso ya que estos explantos poseen un tamaño reducido y además las semillas son de fácil disponibilidad y conservación. Los callos de la variedad Valcatorce no tuvieron una buena expresión transitoria, por ello será preferible transformar embriones cigóticos o inflorescencias inmaduras, inducir callos en medio selectivo y finalmente regenerar plantas transgénicas.