CARGA ALÉLICA (CA) DE JAK2 V617F EN PACIENTES CON NEOPLASIAS MIELOPROLIFERATIVAS (NMP) PHILADELPHIA (Phi) NEGATIVO

PRATTI, ARIANNA; OJEDA; MARA; VOSS, MARÍA EDA; BRAGÓS, IRMA

Rosario

Congreso; Resúmenes del XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual; 2014

Las NMP Phi negativo constituyen un grupo de enfermedades clonales caracterizadas por un aumento en la proliferación del linaje eritroide, megacariocítico o granulocítico. Las patologías más frecuentes de este grupo son Policitemia Vera (PV), Trombocitemia esencial (TE) y Mielofibrosis (MF). La mayoría de estas enfermedades son causadas por la mutación activante JAK2 V617F. Si bien la mayoría de los pacientes con NMP son heterocigotas para JAK2 V617F, un subgrupo de pacientes, más comúnmente con PV, son homocigotas. El mecanismo de homocigosidad, resulta de recombinación mitótica y duplicación del alelo mutado. Del descubrimiento de esta mutación surge la pregunta de cómo la misma mutación puede dar origen a tres enfermedades diferentes. Se han planteado varias hipótesis, una de ellas llamada hipótesis de dosis génica que postula una correlación entre el fenotipo de la enfermedad y la proporción del alelo mutado e introduce el concepto de CA. La CA representa la razón entre el alelo JAK2V617F y el alelo normal. La mejor manera de expresar la CA es como porcentaje de JAK2V617F sobre la totalidad de JAK2. Cuando el alelo mutado es mayor al 75 %, la mayoría de las células hematopoyéticas (> 50 %), son por definición homocigotas para JAK2 V617F.. Objetivo: diseñar una técnica para cuantificar la CA de JAK2 mutado y correlacionarla con el fenotipo clínico. Materiales y métodos: Se estudiaron 75 pacientes JAK2 V617F positivo: 32 con PV, 29 con TE y 14 con MF. Se obtuvo ADN genómico de pacientes al diagnóstico o aquellos que no recibían tratamiento citorreductor. Para determinar la CA se empleó la técnica de PCR en tiempo real (q-PCR), utilizando Eva Green como agente intercalante del ADN. Se diseñaron dos reacciones de qPCR: amplificación alelo específica de JAK2 wild type y amplificación alelo específica de JAK2 V617F. La CA de los 75 pacientes estudiados se expresó como porcentaje de JAK2V617F sobre JAK2 total y se calculó: CA (%)= Nº de copias de JAK2V617F / (nº copias JAK2 wt + nº de copias JAK2V617F) x 100. Resultados: Se encontraron diferencias estadísticamente significativas en los porcentajes de CA entre pacientes con TE (38%) y PV (69%) (p= 0.0002), siendo menor en los pacientes con TE. También se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre pacientes con TE y MF (76%) (p= 0.0001), siendo mayor la carga alélica en pacientes con MF. Existe una tendencia de los pacientes con MF a tener mayores porcentajes de CA que los pacientes con PV, pero la diferencia no fue significativa (p= 0.1555). Con los resultados de CA obtenidos, se estudió la asociación con los valores de Hb (g/dl), Hto (%), GB (x 103 /mm3 ) y Pq (x 103 /mm3 ) que presentaban los pacientes en el momento de la toma de la muestra. No se encontró asociación significativa entre la CA y los valores de Hb y Hto; pero existe una relación moderada y directa entre la CA y los valores de GB y la relación entre CA y recuento de Pq es moderada e inversa y en ambos casos significativamente distinta de cero (p