APLICACIÓN DE FISH EN NEOPLASIAS HEMATOLOGICAS CON BAJO ÍNDICE MITÓTICO

MARONI, GEORGINA; WILLIAMS GLADIS MARCELA; OJEDA MARA; CARBONELL, MAGDALENA; MISAÑA MARINA; PRATTI ARIANNA

Rosario

Jornada; Primeras Jornadas de Ciencia y Tecnología FBIOYF - UNR.; 2021

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. UNR.

Introducción: La leucemia linfocítica crónica (LLC) es la neoplasia hematológica más frecuente en los países occidentales. Dada la heterogeneidad de formas clínicas de presentación se ha hecho imprescindible contar con marcadores biológicos pronósticos y predictivos de respuesta terapéutica, como son algunas anomalías citogenéticas. Las alteraciones moleculares más frecuentes en LLC son la deleción del cromosoma 13 (13q14) relacionados con un mejor pronóstico; deleción del cromosoma 11q (11q23) asociado a un pronóstico adverso; trisomía del cromosoma 12 de pronóstico intermedio; deleción del cromosoma 17 (17p), vinculado a un pronóstico más desfavorable y que está relacionado a resistencia a alquilantes y fludarabina. En etapas tempranas del clon leucémico las alteraciones citogenéticas son raras, pero éstas aparecen en el transcurso de la enfermedad y prevalecen en aquellos pacientes de alto riesgo como en los refractarios al tratamiento convencional. Al momento del diagnóstico es imprescindible el estudio de estas alteraciones. Sobre todo es mandatorio la búsqueda de la del (17p) antes de comenzar el tratamiento, inicial o post recaída, debido a que difieren las opciones terapéuticas. Éstos marcadores pueden ser detectados mediante técnica citogenética convencional, pero el advenimiento de la técnica de hibridación fluorescente in situ (FISH) permitió aumentar la detección de anomalías hasta en el 80% de los casos. Ésta metodología permite conseguir información citogenética aún con bajo índice mitótico, mala morfología cromosómica y en cualquier etapa del ciclo celular. Con FISH en interfase no es necesario cultivar previamente las células, además la cromatina está aproximadamente 10.000 veces más descondensada que en metafase, lo cual permite una mayor resolución para la detección de anomalías pequeñas. Objetivo: Se plantea la puesta a punto de la técnica de FISH para evaluar el pronóstico de LLC y hacerlo extensivo a otras enfermedades con bajo índice mitótico, como es el caso del mieloma múltiple. Materiales y métodos: Se realizó la fijación de células obtenidas de muestras de sangre periférica de cuatro pacientes con diagnóstico de LLC. Después de la fijación, se desnaturalizó el ADN con calor, quedando disponible para ser hibridado con una sonda fluorescente de ADN desnaturalizada. Luego se eliminó el exceso de sonda y se aplicó un contraste de ADN (en este caso DAPI de Cytocell) para su visualización en microscopio de fluorescencia (microscopio Zeizz® Axio A.1). Las sondas utilizadas (kit Aquarius® de Cytocell) fueron: deleción del cromosoma 17 (17p); deleción del cromosoma 11q (11q23) deleción del cromosoma 13 (13q14); trisomía del cromosoma 12. Se analizaron 200 células para cada sonda. Además se realizó hemograma y frotis de cada uno de los pacientes. Resultados: Se analizaron en cada paciente todas las sondas disponibles. Uno de los ellos presentó 65% de trisomía del cromosoma 12, que concuerda con el hemograma alterado (glóbulos blancos: 222.300/mm3; hemoglobina: 7.7g/dL y hematocrito: 24.1%), lo cual sugiere un posible pronóstico menos favorable. El resto de los pacientes no presentó ninguna de las anomalías estudiadas, ni demasiada afectación en el hemograma. Conclusiones: Se logró poner a punto la técnica para detectar las anomalías mencionadas, pero el bajo número de muestras procesadas impide establecer estadísticas. Se espera en un futuro obtener mayor información para el análisis. Además, contamos con sondas específicas de otras alteraciones encontradas en mieloma múltiple para seguir avanzando. Sin duda, la profundización de la caracterización molecular de estas patologías resulta de fundamental importancia en el marco de una medicina traslacional, contribuyendo a un mejor diagnóstico y/o pronóstico, y aportando información para nuevos abordajes terapéuticos en pacientes con enfermedades hematológicas de difícil caracterización.