Clonado, expresión y purificación de la almidón sintasa III de Arabidopsis thaliana.

VALDEZ, H.; BUSI, M. V.; UGALDE, R.; DIEGO FABIAN GOMEZ CASATI

Chascomús

Congreso; XXVI Reunión Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV); 2006

El almidón consta de dos clases de polímeros amilosa (lineal) y amilopectina (con frecuentes puntos de ramificación). Las cantidad relativa de cada uno de estos polímeros conferiría propiedades únicas y distintivas a los diferentes almidones. En plantas superiores, la síntesis de estas moléculas sería llevada a cabo por diferentes isoformas de almidón sintasas: solubles (SSS) y unidas a gránulos (GBSS). La conservación de las diferentes isoformas de almidón sintasas en plantas sugiere que cada una de ellas tendría un papel específico en la síntesis de almidón. Las SSs presentes en A. thaliana son SSI, SSII, SSIII, SSIV y GBSS. Recientemente se ha sugerido que SSIII tendría un rol regulatorio en la biosíntesis de almidón, sin embrago no ha sido caracterizada aún en profundidad. A diferencia de otras isoformas, SSIII está compuesta por dos dominios, uno C-terminal, con alta similitud a la glucógeno sintasa de bacterias, y un dominio N-terminal específico de plantas superiores. En el presente trabajo, clonamos, expresamos y purificamos SSIII recombinante de A. thaliana en células de E. coli. La proteína fue purificada mediante una cromatografía de afinidad a Niquel en un solo paso. El análisis por SDS-PAGE reveló una única banda proteica de 105 kDa. Los resulados indican que SSIII de A. thaliana es funcional y posee actividad glucosil transferasa. El análisis cinético comparativo con una forma truncada de la SSIII sugiere que el extremo N-terminal tendría un rol importante en la regulación de la enzima.