INVESTIGADORES
GOMEZ CASATI Diego Fabian
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización Funcional de Starch Binding Domains (SBD) de la almidón sintasa III de Arabidopsis thaliana
Autor/es:
BUSI, M. V.; PALOPOLI, N.; VALDEZ, H.; FORNASARI, M. S.; DIEGO FABIAN GOMEZ CASATI; PARISI, G.; UGALDE, R.
Lugar:
Chascomus
Reunión:
Congreso; XXVI Reunión Argentina de Fisiología Vegetal (SAFV); 2006
Resumen:
La Almidón Sintasa III (SSIII, Starch Synthase III), una proteína de 1025 aminoácidos, es una de las enzimas involucradas en la síntesis de almidón en vegetales. La SSIII de Arabidopsis thaliana contiene un péptido tránsito N-terminal seguido por un dominio SSIII específico con tres repeticiones internas, y un dominio C-terminal de 450 aminoácidos. A través de análisis bioinformáticos observamos que cada una de estas repeticiones de la porción N-terminal codifica un Starch Binding Domain (SBD, Dominio de Unión al Almidón), dominios descriptos ampliamente en proteínas microbianas que degradan almidón y nunca en enzimas de síntesis. Aunque la SSIII de A thaliana y sus proteínas homólogas relacionadas no muestran similitud en secuencia con SBDs previamente descriptos y caracterizados, los residuos aminoacídicos conocidos como responsables de la unión al almidón están altamente conservados. El objetivo de este trabajo fue dilucidar las propiedades estructurales y funcionales de los SBDs de la SSIII de A thaliana y su caracterización. Para ello a partir de ARN de hojas de plantas jóvenes de A thaliana y por RT-PCR clonamos el extremo N-terminal de la proteína SSIII de forma total y truncada (tres SBDs juntos, dos y uno) mediante la utilización de cebadores específicos. Las construcciones se realizaron en el vector pET32 c (Novagen) y se transformaron células de Escherichia coli para la expresión y purificación de las diferentes proteínas recombinantes por unión a una resina de amilosa (E8021S, New England BioLabs). Los resultados mostraron que el fragmento que posee tres SBD se une más fuertemente a la resina que el que posee dos y uno. Este es el primer hallazgo y prueba funcional de dominios SBD en enzimas de síntesis de almidón.
