Desarrollo de un sistema de PCR colorimétrico para la identificación y tipificación de papilomavirus humano oncogénicos

CHOUHY, DIEGO; BENITEZ GIL, L.; NOCITO, ANA L.; CITTADINI, J.; GARDIOL, DANIELA; ADRIANA ANGELICA GIRI

Buenos Aires

Congreso; I Congreso Internacional de Patología del Tracto Genital Inferior y Colposcopía; 2004

Sociedad Argentina de Patología del Tracto Genital Inferior

Los HPV oncogénicos, en particular los tipos 16, 18, 31 y 33 se encuentran asociados a la mayoría de los carcinomas de cuello de útero. La infección con HPV de tipos oncogénicos es el evento clave en el desarrollo del cáncer cervical. Si bien el Papanicolaou (Pap) redujo notablemente la incidencia de cáncer cervical, se siguen registrando casos de neoplasias cervicales en mujeres controladas con el Pap, lo que indicaría que se llegado al límite de sensibilidad de esta metodología. Por ello, disponer de un ensayo molecular para la detección de HPV oncogénicos facilitaría el diagnóstico precoz del cáncer cervical. Aquí presentamos el desarrollo del L1HPVPCR, un ensayo basado en la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) con revelado colorimétrico para la detección y tipificación de los HPV oncogénicos. El ensayo presenta las siguientes características: i) amplificación de una porción de L1 de HPV con los cebadores MY11 y MY09 biotinilado; ii) hibridación líquida del amplicón biotinilado a una sonda genérica conjugada con fluoresceína; iii) captura de los híbridos a una microplaca revestida con estreptavidina; iv) detección con anticuerpo anti-fluoresceína conjugado con peroxidasa y un cromóforo; vi) lectura de absorbancia en lector de microplacas; vii) tipificación de las muestras HPV-positivas con sondas específicas para HPV-16, -18, -31 y -33. El L1HPVPCR optimizado resultó ser reproducible, sensible (1x10-3 copias de HPV/célula), específico, de fácil ejecución y de bajo costo. Para convalidar la aplicabilidad de la técnica para el diagnóstico se analizaron 73 muestras de cepillado cervical. El ADN viral fue encontrado en el 64% (47/73) de éstas y tipificado en el 53% (25/47). Estos resultados, comparados con el Pap, indican al L1HPVPCR como un sistema de mayor sensibilidad para la identificación de pacientes a riesgo de desarrollar cáncer cervical.